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生物样品如生物体液(尿、血)及中药，介质组分复杂、待测药物类型众多，待测药物含量少，特别是活性样品成分一般浓度较低，分析时容易受到干扰。虽然少数情况将体液做简单处理后可直接进行分析，但由于干扰的存在，大大降低了方法的灵敏度和准确性。由于现今分析检测技术灵敏度可提高的空间越来越小，因此本课题将研究重点集中到样品的纯化处理上，以期排除影响检测的干扰物质，为被分析物提供良好的检测环境，从而提高方法的检测能力。据试验统计，在整个的生物样品分析过程中，30％的误差及61％时间都来自样品的前处理，样品的分离纯化已经成为制约分析速度、灵敏度、准确度的主要问题。因此，样品分析前的分离纯化越来越成为分析化学家关注的焦点，关于此方面的研究在逐年增加。 本文建立了选择性好的共沉淀一衍生、新颖的中空纤维离心超滤技术及特异性吸附分离技术分析了基质组成复杂的尿、血及中药中的活性成分。主要选择了生物基质中性质特殊、较难分析的活性或指标成分作为研究的主要内容，如极性强、色谱行为差的双膦酸盐类物质伊班膦酸钠，极性强的橙皮苷、极粘稠刑侦检材全血中的吩噻嗪类药物等等。为生物样品中活性成分的分析提供了简单、新颖、有效而可靠的纯化手段。 第一部分LC-MS/MS法分析尿液样品中的伊班膦酸钠 目的：建立一个LC-MS/MS法用于尿液样品中伊班膦酸钠的分析，并应用于维生素D3对伊班膦酸钠吸收影响的研究。 方法：利用伊班膦酸钠在碱性条件下可与CaCl2-K2HPO4共沉淀，将其与生物基质分离。液液萃取后伊班膦酸钠经三甲基硅基重氮甲烷衍生，从而降低了伊班膦酸钠的极性实现了其在反相色谱柱上的分离，并采用ESI源正离子模式多反应监测进行测定。伊班膦酸钠及其内标的检测离子对分别为m/z376.1/114.2和379.1/61.2。 结果：伊班膦酸钠在1～200 ng·mL-1范围内线性关系良好，相关系数r大于0.99。日内、日间精密度的相对标准偏差(RSD)小于15％，伊班膦酸钠的回收率大于86.5％。 结论：本法选择性好、准确、灵敏度高，为尿液样品中伊班膦酸钠的分离分析提供了一个切实可行的检测手段，可用于维生素D对伊班膦酸钠吸收影响的研究。为评价共存辅药及辅料对伊班膦酸钠吸收行为的影响提供了一个分析平台。 第二部分中空纤维离心超滤技术在中草药中小分子活性成分纯化分析中的应用 一、中空纤维离心超滤-HPLC法分析藿香正气水中的橙皮苷 目的：建立分析含有高分子杂质的中草药中极性物质的中空纤维分离离心超滤前处理方法，并用于藿香正气水中橙皮苷的分析。 方法：试验采用新型中空纤维微量离心超滤装置(HFCUF)纯化样品溶液，在离心力作用下，利用中空纤维超滤膜去除样品溶液中的大分子，延长了色谱柱的使用寿命，提高了分析的重现性和准确性。分析方法以Promosil C18为色谱柱(4.6 mm×150 mm，I.D.5μm)，流动相为甲醇：0.5％的乙酸水溶液=35:65，流速1 mL·min-1，检测波长283 nm，柱温30℃。 结果：橙皮苷浓度在4.69μg·mL-1～150μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9997)，平均加标回收率为100.1％，RSD2.4％。 结论：本法简便快速、结果准确，为中药中极性活性成分的测定提供了新的、简单廉价的前处理手段。 二、直接进样HPLC法同时分析藿香正气水中的厚朴酚及和厚朴酚 目的：建立中空纤维分离-HPLC法测定藿香正气水中和厚朴酚及厚朴酚含量的方法。 方法：试验采用新型中空纤维微量离心超滤装置(HFCUF)纯化样品溶液，在离心力作用下，利用中空纤维超滤膜去除样品溶液中的大分子，提高了色谱柱的使用寿命，提高了分析的重现性和准确性。分析方法以Diamonsil C18为色谱柱(4.6 mm×150 mm，I.D.5μm)，流动相为甲醇：乙腈：0.5％的乙酸水溶液=44:22:34；流速1 mL/min，检测波长294 nm，柱温30℃。 结果：和厚朴酚及厚朴酚分别在6.40～205μg·mL-1、3.15～101μg·mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9999)，加样回收率大于92.6％，RSD小于3.0％。 结论：本法简便快速、结果准确，为藿香正气水中和厚朴酚及厚朴酚的测定提供了新的、简单廉价的前处理手段。为高分子的中草药样品中小分子活性成分的分析提供了方便可行的手段。 第三部分基于中空纤维的固相微萃取与UPLC-MS/MS联用应用于全血及尿中5种抗精神病药物的分析 目的：建立一个灵敏、快速、特异的中空纤维吸附萃取-UPLC-MS/MS测定法同时分析全血及尿液样品中5种抗精神病类药物。 方法：将一根长12 cm的中空纤维置于1 mL1:1稀释的全血或10 mL尿液样品中(氨水调pH值9-10)，超声浴或震荡萃取20 min，经1 mL甲醇超声浴20 min解吸附，取5μL进样分析。ACQUITY UPLC HSS C18(1.7μm，2.1×50 mm)分离，Xevo()TQ-S MS串联四级杆质谱仪检测。乙腈-5mM NH4AC-1％HAC溶液梯度洗脱，流速为0.5 mL·min-1。 结果：五种吩噻嗪类物质分别在12.5 pg·mL-1～10 ng·mL-1(尿样)、25pg·mL-1～10 ng·mL-1(全血样)范围内线性关系良好，相关系数均大于0.99。日内、日间精密度的相对标准偏差小于5.2％，测得空白基质加样的均值在真实值的±15％以内，准确度良好。 结论：本法操作简单、快速，灵敏度高，线性范围宽，适合复杂基质中(全血、尿液样品)痕量目标分析物的分离分析。为法学科学对此类药物滥用的监查提供了一个可靠的分析工具。