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小诺霉素(Micronomicin,MCR)是庆大霉素(GM)的C2b组分,抗菌谱较广,耳肾毒性低,且对6′-N-乙酰化酶的耐药菌仍有活性,是一种替代GM的新型氨基糖苷类抗生素。本文对两株出发菌株进行自然分离,并对菌株产量分布进行参数分析。根据优良出发菌株应当具有高产、稳产、不易蜕化的特性,选择产量分布具有较大的产势A、较高的平均效价、稳度Ct和偏度Cs的菌株201-9#作为实验研究的出发菌株。 从生产小诺霉素的绛红小单孢菌(Micromonospora purpura)201-9#出发,采用微波诱变,并结合耐自身代谢物的驯育,筛选获得两株遗传稳定性较好的高产菌株201-9#-28’和201-9#-95’,其生物效价与出发菌株相比分别提高了42.1%和59.6%。 本文对绛红小单孢菌(Micromonospora purpura)201-9#出发株的原生质体制备和再生育种进行了系统的研究。实验结果显示,原生质体制备及再生的最佳方法和条件为:菌丝培养48h后以10%的接种量转接至含0.3%甘氨酸(Gly)的种子培养基中继续培养48h,菌丝预处理后进行原生质体制备酶解反应。酶解参数为:溶菌酶浓度15mg/ml,酶解时间90min,酶解温度37℃。酶解结束后,将纯化的原生质体悬浮液适当稀释,采用双层平板法涂布于上层琼脂浓度为0.8%的再生培养基R2上再生,筛选高产的突变菌株。 实验根据原生质体对诱变剂的敏感性高于孢子的特点,将原生质体再生与紫外诱变结合研究,选育到二株生物活性有较大提高和遗传稳定的小诺霉素突变菌株201-9#-465和201-9#-479,其生物效价比出发菌株分别提高了57.1%和71.7%,组分比分别达到C2b:C1a=7:3和C2b:C1a=6.5:3.5,有效地提高了筛选菌株生产小诺霉素的效价和组分比。