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目的：研究重组腺病毒Ad/PSCAE/UPII/E1A-AR, Ad/PSCAE/UPII/E1A, Ad/PSCAE/UPII/Luc的体内外抗膀胱肿瘤效应,探索其中可能存在的机制,为膀胱癌的临床研究提供基础理论和基本数据,为膀胱癌的治疗提供一种的新的治疗策略。方法：HEK293扩增重组腺病毒,氯化铯密度梯度离心,TCID50测定滴度,经PCR确认各基因片段的正确性。重组腺病毒感染膀胱肿瘤细胞EJ、5637、BIU87、T24,正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1及肝癌细胞SMMC-7721,联合雄激素受体激动剂R1881及雄激素受体拮抗剂氟他胺进行干预,观察细胞形态学变化,MTT法进行抗细胞增殖研究,结晶紫染色检测细胞毒性。RT-PCR、western blot检测E1A基因的转录和翻译。为了研究重组腺病毒发挥作用的可能机制,我们检测了caspase3的酶活性、细胞周期的变化,透射电镜观察感染病毒后的膀胱肿瘤细胞的超微结构变化,TUNEL观察肿瘤细胞的凋亡。另外,建立皮下膀胱肿瘤裸鼠模型,随机分为4组：生理盐水组、Ad/PSCAE/UPII/E1A-AR处理组、Ad/PSCAE/UPII/E1A处理组、Ad/PSCAE/UPII/Luc处理组。给予瘤体内多点注射重组腺病毒。实验结束时对肿瘤及主要脏器进行取材,HE染色观察病理学变化；提取组织RNA及蛋白,RT-PCR、western blot检测E1A基因的转录和翻译。电镜观察肿瘤组织内病毒的分布。结果：成功获得高滴度、高纯度重组腺病毒,重组腺病毒可有效抑制膀胱肿瘤细胞的增殖,并呈剂量、时间依赖性,而对正常膀胱上皮细胞及非膀胱肿瘤细胞未见明显影响。R1881可增强重组腺病毒的抗增殖效应,而氟他胺对该效应未见明显影响。通过流式细胞仪检测细胞周期,发现重组腺病毒感染后G1期膀胱肿瘤细胞明显增多；与Ad/PSCAE/UPII/Luc相比,Ad/PSCAE/UPII/E1A-AR、 Ad/PSCAE/UPII/E1A感染后的膀胱肿瘤细胞具有较高的caspase3酶活性。透射电镜显示重组腺病毒感染后的膀胱肿瘤细胞内出现大量病毒颗粒,并见到染色质凝聚、核断裂,而未感染重组腺病毒的膀胱肿瘤细胞内未发现该现象。通过免疫荧光染色发现AR位于细胞核内,而CAR位于细胞膜表面。TUNNEL分析发现重组腺病毒Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A、Ad/PSCAE/UPII/E1A-AR感染后的膀胱肿瘤细胞在荧光显微镜下可看到大量凋亡细胞。通过RT-PCR及western blot发现感染Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A、Ad/PSCAE/UPII/E1A-AR后的膀胱肿瘤细胞高表达E1A,而正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1未检测到。与Ad/PSCAE/UPⅡ/Luc治疗组、生理盐水组相比,Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A、Ad/PSCAE/UPII/E1A-AR显著抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长,抑制率达77%,并可显著延长荷瘤鼠的寿命。HE染色显示Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A、Ad/PSCAE/UPII/E1A-AR治疗组裸鼠肿瘤组织内见大量坏死灶,而肝、肺、脑内未见明显变化。透射电镜显示实验组裸鼠肿瘤组织胞浆内见大量病毒颗粒,排列呈晶格状。结论：重组腺病毒经HEK293细胞扩增后,经过纯化及鉴定,获得了较高纯度和滴度的重组腺病毒；含有E1A-AR的重组腺病毒对膀胱肿瘤细胞具有显著抗增殖效应,R1881可以促进该增殖效应,而氟他胺对该增殖效应不能造成影响；重组腺病毒可诱导膀胱肿瘤细胞凋亡,阻滞细胞周期于G1期；人膀胱癌EJ细胞株成功建立膀胱癌移植瘤裸鼠动物模型,为研究人类膀胱癌提供可靠依据；重组腺病毒有效抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长,延长荷瘤鼠寿命。含有E1A-AR的重组腺病毒首次用于研究人膀胱癌,为人类膀胱癌的治疗提供新的策略；