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穿山龙为薯蓣属植物穿龙薯蓣的干燥根茎,其主要成分薯蓣皂苷元是合成多种甾体激素类药物的原料之一,市场需求量大,穿山龙等薯蓣药材的资源紧缺。本实验室前期已从穿龙薯蓣.根茎和叶片中分离筛选出一株能够通过固体发酵提高穿山龙中薯蓣皂苷元含量的内生真菌C39。为进一步研究C39提高薯蓣皂苷元含量的作用机制,找到药材中通过C39菌生物转化生成薯蓣皂苷元的前体物质,本实验以液体发酵为基础,对C39菌生物转化穿山龙药材中的甾体皂苷类成分进行研究。首先,根据穿山龙药材化学成分极性的差异,制备药材不同的极性组分部位(石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位),分别用C39菌与其进行液体发酵培养,以发酵物中薯蓣皂苷元含量提高为指标,确定了与内生菌C39发生生物转化的药材极性部位为正丁醇部位。其次,通过对穿山龙药材正丁醇部位液体发酵,结合TLC法和UPLC法对液体发酵产物中甾体皂苷类成分进行分析,发现呋甾皂苷类成分逐渐减少,螺甾皂苷类成分逐渐增加,推断生物转化过程中可能发生了呋甾皂苷向螺甾皂苷的转化,呋甾皂苷可能为生物转化产生新的薯蓣皂苷元类化合物的前体物质,因此将分离穿山龙药材正丁醇部位的呋甾类皂苷作为下一步的实验目标。采用大孔吸附树脂,硅胶柱分离以及制备高效液相等方法分离、制备了可能的生物转化底物,并将得到的底物与C39菌进行转化验证。经TLC、UPLC分析,发现并得到了内生菌C39生物转化提高穿山龙薯蓣皂苷元含量的两种呋甾皂苷类前体物质——化合物1和化合物2。最后,利用核磁共振波谱法(13C-NMR、1H-NMR及HMBC谱等)以及质谱检测手段,结合化学分析结果,确定了化合物2的结构,为26-氧-β-D-吡喃葡萄糖基-3,26二醇-25(R or S)-5,20(22)-二烯呋甾3-氧-α-L-鼠李糖糖基(1→2)-[α-L-鼠李糖糖基(1→4)]β-D-吡喃葡萄糖苷(26-O-β-D-glucop yranosyl-3,26-diol-25(R or S)-△5,20(22)-diene-furosta-3-O-α-L-rhamnopyra nosyl(1→2)-[α-L-rhamnopyranosyl(1→4)]-β-D-glucopyranoside)。化合物1的化学结构有待进一步分离和鉴定。