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近年来,人类生产活动增多,海洋压力逐渐增大,海水富营养化愈发严重。我国北方贝类养殖户每年都会面临大型海藻肆虐的问题,影响贝类生长。药物消除、人工捕捞方法耗费大量人力物力,天然饵料中的植物蛋白得不到充分利用,造成资源浪费,且制约贝类养殖产业健康发展。在此形势下,我们需要开辟绿色、低碳的生态养殖新模式。多营养层次综合养殖模式能够充分利用养殖水体内的物质和能量及养殖生物的容纳量,因此本课题利用点篮子鱼、文蛤食性特点将其混养,实现物质高效利用,提高系统经济产出。点篮子鱼(Siganus guttatus)是海水杂食性鱼类,喜食大型藻类,被认为是水产养殖的优良品种,符合我国当前健康生态养殖模式发展的需求。养殖密度能够显著影响水产品质量,对水产品品质具有重要意义。通过开展点篮子鱼与文蛤(Meretrix meretrix)混养实验,对养殖系统内能量流动进行跟踪测定,并分析不同点篮子鱼混养密度下鱼贝生长、肌肉品质差异以及造成不同品质的分子调控途径,得出适宜混养密度,使得能量和营养物质在鱼贝混养系统中得到充分利用甚至循环利用,降低养殖中营养和经济损耗,提高养殖系统生物容量,抑制养殖池内藻类大量繁殖,保证水产品质量安全,在单位面积上创造最大的生态效益,初步构建点篮了鱼-浒苔-文蛤稳定的生态养殖系统。1.室内点篮子鱼与文蛤混养模式初步探究为探索点篮子鱼密度对鱼贝生长及肌肉的影响,本实验进行了点篮子鱼与文蛤混养模式初步研究。设置点篮子鱼密度10 ind·m-3(T1),30 ind·m-3(T2),50 ind·m-3(T3),70 ind·m-3(T4)与文蛤混养,实验为期56天。结果显示,生长方面:(1)点篮子鱼:T1组点篮子鱼终末体重、增重率显著高于T4组(P<0.05),且T1组特定生长率、摄食率最高,饲料系数显著低于其他3组(P<0.05);T1组与T2组脏体比差异不显著(P>0.05),但显著高于T3、T4组(P<0.05)。(2)文蛤:各组文蛤生长均无显著差异。肌肉营养方面:(1)点篮子鱼:T3、T4组点篮子鱼肌肉氨基酸总质量分数显著高于T1、T2组(P<0.05);必需氨基酸中赖氨酸在各组所占质量分数最高;T3组EAAI最高,显著提升肌肉必需氨基酸含量,特别是Asp、Glu、Arg、Lys得到显著升高。(2)文蛤:T2组氨基酸总质量分数显著高于其他组(P<0.05);必需氨基酸组成中各类氨基酸含量随点篮子鱼养殖密度的增加先升高后降低;各组必需氨基酸中均是亮氨酸占比最高;各组评分最低的均为缬氨酸;T2组肌肉必需氨基酸中Asp、Glu、Ala、Arg、Lys含量达到最高。实验结果表明,对点篮子鱼来说,放养密度在50 ind·m-3可显著提升肌肉必需氨基酸含量,且该组点篮子鱼肌肉氨基酸组成有更好的平衡性;对文蛤来说,放养点篮子鱼30 ind·m-3时其肌肉中必需氨基酸组成优于其他组,氨基酸组成平衡性及蛋白质质量最优。2.点篮子鱼与文蛤混养中物质利用研究为了解浒苔中营养物质在鱼贝混养系统中的流动和利用情况,将点篮子鱼与文蛤混养,采用标记物方法对浒苔进行跟踪测定,并对点篮子鱼对各类营养物质的表观消化率进行了测定。结果显示,点篮子鱼对浒苔中粗蛋白的表观消化率达66.64%,对粗脂肪的表观消化率达60.48%,对丝氨酸的表观消化率最低,为60.19%,其余各类氨基酸表观消化率都在60%以上;分析标记物含量得出,点篮子鱼摄食浒苔后,吸收利用60%以上营养物质用于自身生长发育和代谢,文蛤对点篮子鱼排泄物的消化率达12.5%。实验结果表明,点篮子鱼与文蛤处于不同营养层级,二者混养能够使营养物质达到充分利用,提高养殖容纳量,实现养殖系统内物质循环利用。3.不同点篮子鱼密度下鱼贝转录组分析为探究不同养殖条件下鱼贝肌肉在分子水平的响应,得出发挥关键作用的信号通路,本研究设置3个点篮子鱼密度:F1(10 ind·m-3),F2(30 ind·m-3),F3(50 ind·m-3),与文蛤混养56d后对鱼贝肌肉转录组进行比较分析。(1)点篮子鱼:GO功能富集结果得出,三组点篮子鱼肌肉在三大功能类中有部分重合。AMPK信号通路、泛素介导的蛋白质降解信号通路在点篮子鱼肌肉品质调节中发挥重要作用。当点篮子鱼养殖密度增大时,蛋白质降解相关基因上调,泛素介导的蛋白质降解过程被激活。(2)文蛤:氮代谢、多种氨基酸代谢在肌肉品质中发挥重要作用。30 ind·m-3组文蛤体内谷氨酸脱氢酶(GDH)、碳酸酐酶(CA)表达量相对于10 ind·m-3组显著降低,谷氨酰胺合成酶(GS)、硝酸盐还原酶(NR)表达量显著升高,而与50 ind·m-3组差异不显著。高密度的点篮子鱼混养会加强文蛤从外界获取硝酸盐的能力。GS表达量升高,使文蛤体内谷氨酸含量增多,提升文蛤的鲜味。实验得出,不同点篮子鱼混养密度对鱼贝肌肉品质分子调控机制有很大影响,点篮子鱼体内AMPK信号通路和泛素介导的蛋白质降解通路发挥关键作用,文蛤体内氮代谢途径发挥重要功能,调节肌肉氨基酸组成,进而影响肌肉品质。