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目的:本研究旨在探讨Omi/HtrA2基因及蛋白水平在人涎腺腺样囊性癌不同细胞株中的表达变化,及其对人腺样囊性癌细胞凋亡的影响。
方法:选取人涎腺腺样囊性癌高肺转移潜能和低肺转移潜能的细胞株。1、细胞传代,利用倒置显微镜观察不同细胞株的形态学差异,利用免疫细胞化学检测传代细胞株中CEA、EMA在肿瘤细胞的表达,证实传代的成功;2、采用CMIAS真彩色病理图像分析系统对两种不同细胞株的细胞核、细胞浆的面积、核浆比例、细胞周长、平均直径、圆度、形状因子等形态学指标进行检测,统计分析,获得脱落细胞形态学原始数据,进行细胞形态学的对比研究。3、采用流式细胞术方法检测培养12h、24h、36h、48h、60h、72h时间节点Omi/HtrA2蛋白在两种细胞株中的表达情况以及细胞周期分布差异。4、采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Omi/HtrA2mRNA在两种腺样囊性癌细胞株中传代培养12h、24h、36h、48h、60h、72h时间节点的表达差异。
结果:
1.传代培养后经免疫细胞化学检测CEA、EMA的表达情况,结果在高肺转移细胞株中的阳性细胞比率为84.33%±6.77%和82.88%±5.26%,在低肺转移细胞株中的阳性细胞比率分别为88.84%±7.27%和80.84%±6.16%,两种指标在不同细胞株中的阳性率比较差别无统计学意义(P>0.05)。同时证明两种细胞株的传代培养成功。
2.高肺转移细胞株呈梭形排列,粘附性较差,随传代时间的延长,细胞异型性更加明显、且梭形变较突出;低肺转移细胞株呈圆形或卵圆形,细胞粘附性较前者略好,体积较小,细胞异型性不明显;通过细胞形态学图像分析系统对两组细胞株进行形态学分析,结果显示两种细胞株在细胞面积、周长、等效直径、长径、短径间存在明显差异,高肺转移组明显高于低肺转移组,差别有统计学意义(p<0.05);两组细胞株的细胞变异参数面积、周长、等效直径、长径、短径间存在明显差异,高肺转移组明显低于低肺转移组组(P<0.05)。
3.高肺转移细胞株的细胞凋亡指数为12.8%±0.9%,低肺转移组细胞凋亡指数为35.6%±4.3%,后者高于前者,两组差别有统计学意义(P<0.05)。高肺转移细胞株G1、G2、S期的细胞比值分别为56.44%±4.78%、6.4%±1.66%和37.22%±5.37%;低肺转移细胞株的细胞比值分别为78.4%±5.96%,4.2%±0.45%和17.4%±4.25%;统计分析显示:高肺转移细胞株G1期比率明显低于低肺转移细胞株(P<0.05);G2期比率在两组细胞株间无明显差异(P>0.05);S期比率在高肺转移细胞株明显高于低肺转移细胞株(P<0.05)。高肺转移细胞株Omi/HtrA2蛋白的阳性表达率为18.4%±4.25%,低肺转移组为45.6%±8.17%,高肺转移细胞株明显低于低肺转移细胞株,差别有统计学意义(P<0.05)。
4.RT-PCR扩增结果显示:Omi/HtrA2mRNA在高肺转移性人涎腺腺样囊性癌细胞株中六个不同培养时间节点均存在低表达,而在低肺转移组细胞株中呈高表达,差别有统计学意义。
结论:
1.不同转移潜能的人涎腺腺样囊性癌细胞株在形态学参数方面存在一定的差异,这可能是造成其具有不同转移潜能的结构基础;
2.高肺转移细胞株的凋亡指数和细胞周期分布与低肺转移细胞株存在明显差异,同时两组细胞株的Omi/HtrA2 mRNA及蛋白的表达存在明显的差别,后者可能是导致细胞凋亡以及肺转移潜能差异的关键因子。