论文部分内容阅读
目的:比较槲皮素脂质体纳米粒化后对肝癌HepG2细胞的抑制作用是否优于纯槲皮素。
方法:
1.以适量槲皮素为原料,少量PEG400与5[%]葡萄糖溶液为试剂,用1000ml茄形烧瓶、旋转蒸发器为仪器制得槲皮素混悬液。以磷脂、胆固醇、槲皮素及十八胺/磷脂酰丝氨酸为原料采用薄膜蒸发--高压均质法分别制备得槲皮素脂质体纳米粒与空白脂质体纳米粒。
2.以HepG2细胞株为原料,PBS液冲洗,胰酶消化,培养液(高糖DMEM粉+双蒸水)营养,37℃CO<,2>培养箱中培养,得梭形,生长状态良好,光亮性好的 HepG2 细胞。
3.HepG2细胞按每孔5000个/1.5 m1接种到24孔扳中,注入1m1琼脂悬液,分别加入7.625mg/L槲皮素,槲皮素纳米粒,空白纳米粒(每孔25μ1),以HepG2细胞为对照(加入PBS每孔25μ1),培养7~10天,肉眼镜下观察细胞集落,分析槲皮素纳米粒对HepG2肝癌细胞的抑制情况。
4.HepG2细胞按每孔10000个/150μl接种于96孔扳,分别加入不同浓度的槲皮素,槲皮素纳米粒,空白纳米粒进行培养(每孔50μ1),以}tepG2细胞为对照(加入PBS每孔50μ1),24小时,48小时后,用MTT观察细胞生长状况,分析抑制情 况。
5.HepG2细胞按每孔5×10<6>/9m1个接种在4个50ml培养瓶中,分别加入76.25mg/L槲皮素,空白脂质体纳米粒,槲皮素脂质体纳米粒,48小时后裂解提取DNA,分别进行DNA.电泳。
结果:
1.槲皮素纳米脂质体粒径为133±25nm,载药量为5.08±0.17mg/ml,包封率为90.2±1.57%。空白纳米脂质体 粒径约为164±20nm。
2.HepG2细胞生长的状态良好,数量较多,梭形,光亮性好。
3.通过软琼脂集落培养发现(肉眼镜下观察),加入PBS细胞集落约207个,加入空白脂质体细胞集落L约153个,加入槲 皮素集落约132个,加入槲皮素脂质体纳米粒集落约86个。
4.通过MTT发现:24小时光密度值:同浓度的槲皮素脂质体纳米粒与槲皮素,空白脂质体纳米粒比较,差异并不明显,与5-Fu比较,只有浓度3,有明显差异(较同浓度的5-Fu大)。48小时光密度值:同浓度的槲皮素脂质体纳米粒明显较槲皮素,空白脂质体纳米粒小,与5-Fu比较,明显较大。
5.通过DNA电泳发现大分子DNA,纯槲皮素,空白脂质体纳米粒,槲皮素脂质体纳米粒较正常对照组多,而小分子DNA纯槲皮素,空白脂质体纳米粒,槲皮素脂质体纳米粒较正常对照组少。
结论: 进一步证实了槲皮素对HepG2肝癌细胞的抑制作用。脂质体载体本身也有抑制HepG2细胞的作用(其机理待进一步研究)。在所使用的浓度范围内,槲皮素脂质体纳米粒对体外肝癌HepG2细胞的抑制作用更优于纯槲皮素。槲皮素,空白脂质体纳米粒,槲皮素脂质体纳米粒对肝癌HepG2细胞的抑制作用并不是通过破坏观察到的DNA而达到的。