益气温阳汤对变应性鼻炎小鼠NK细胞趋化及分化作用的体外实验研究

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目的:通过体外实验观察益气温阳汤对变应性鼻炎小鼠NK细胞趋化及分化作用的研究,探究益气温阳汤治疗变应性鼻炎的可能机制。研究方法:将30只小鼠随机分为空白组、模型组、益气温阳汤低、中、高剂量组及西替利嗪组,共6组,每组5只,空白组不造模,其他五组造模;除空白组外其他变应性鼻炎小鼠模型建立后,空白组、模型组灌胃生理盐水,中药组分别灌服益气温阳汤低、中、高三种不同浓度的水煎液,西替利嗪组灌服西替利嗪水溶液;建立体外变应性鼻炎小鼠NK细胞模型,对小鼠进行7天灌药后制备空白组、模型、中药低中高剂量组以及西替利嗪组血清,取正常小鼠5只,处死分离脾脏,分离纯化NK细胞;以粉尘螨代谢培养基提取液作体外刺激剂,用Transwell法及CCK-8法检测NK细胞迁移能力,用Elisa法测定NK细胞内的IL-5、IL-10、IL-4、IFN-γ的表达情况。组间差异相比较选用One-Way ANOVA(单因素方差分析)分析方法,方差齐时组间两两比较采用Bonferroni法。结果:1.变应性鼻炎小鼠NK细胞趋化实验:在下室(24孔板底部)加入刺激剂后,上室(Transwell小室)内NK细胞数量明显减少。在下室含益气温阳汤低、中、高剂量各组中加入刺激剂后,上室(Transwell小室)NK细胞数量明显增多,但益气温阳汤低、高剂量组未均恢复到空白组水平,而益气温阳汤中剂量组与空白组水平无明显差异(P>0.05)。中药中剂量组抑制NK细胞向加入刺激剂的下室趋化的作用明显高于高剂量组,而中药低剂量组抑制NK细胞向下室趋化的作用与中药中、高剂量组相当(P>0.05),总体来看,中药中剂量组抑制NK细胞向加入刺激剂的下室趋化的作用最佳,中药各组效果与西替利嗪作用相当(P>0.05)。2.变应性鼻炎小鼠NK细胞分化实验:体外刺激后,NK2型细胞因子IL-4、IL-5以及NK1型细胞因子IFN-γ浓度明显上升,NK1型细胞因子IL-10浓度明显下降。益气温阳汤低、中、高剂量抑制NK2型细胞因子IL-4、IL-5的分泌,促进NK1型细胞因子IL-10的分泌,但IL-4、IL-5、IL-10浓度均未恢复到正常空白组水平,中药中剂量组抑制体外刺激后NK2型细胞因子IL-5、IL-4释放效果明显高于其他两组,效果最好,且中药中剂量组效果抑制NK2型细胞因子IL-5、IL-4释放效果与西替利嗪作用相似(P>0.05)。在IL-10上,中药中剂量组血清中IL-10浓度明显高于其它两组,效果最好,而西替利嗪抑对NK1型细胞分泌的IL-10促进作用与中药中剂量组相当。在IFN-y上,中药各剂量组与西替利嗪无促进作用。结论:益气温阳汤能明显抑制变应性鼻炎小鼠NK细胞向炎症部位趋化,减少由于NK细胞迁移至病变部位释放NK2型炎性细胞因子加重炎症反应,能够下调变应性鼻炎小鼠NK2型细胞释放的IL-5、IL-4等炎性细胞因子,并促进NK1型细胞因子IL-10的分泌,从而调节NK2型反应偏倚状态,进而能够抑制其后的一系列变态反应。由此推测益气温阳汤能够通过调控NK细胞的趋化以及细胞因子的分化来治疗变应性鼻炎。
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