论文部分内容阅读
呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)是引起婴幼儿急性下呼吸道感染的重要病原体之一,同时也是造成儿童、老龄人以及免疫能力低下的病人发病甚至死亡的主要原因。预防RSV最有效的方法就是接种疫苗,但到目前为止仍未见安全有效的RSV疫苗问世,因此,对RSV的流行趋势、分离纯化、培养特性等相关知识的研究为进一步研发RSV疫苗提供了重要的参考依据。本论文的实验研究工作主要包括三个方面：(1)临床样本的Vero细胞分离培养物中的病毒检测；(2)RSV分离株的鉴定及分型；(3)RSV分离株的培养特性研究。(1)临床样本的Vero细胞分离培养物中的病毒检测本实验将从48份儿童痰样中筛选到的11份能引起Vero细胞发生合胞现象的分离培养物进行几种常见的呼吸道病毒检测,结果表明11份培养物中,RSV有5份,MuV有7份,PIV2型病毒疑似有4份,PIV3型病毒有2份,AdV有10份,MeV、PIV1型和RV病毒没有。同时发现只有培养物QY-33是相对单一的RSV感染,其他均为两种或两种以上能引起Vero细胞发生合胞现象的常见呼吸道病毒的混合感染。(2)RSV分离株鉴定及分型将唯一一株相对单一RSV感染的分离培养物QY-33进行噬斑纯化,得到一株RSV分离株QY-33,并对其进行鉴定及测序比对,确定此分离株为RSV病毒；然后经巢式PCR扩增出此分离株的G蛋白基因,通过测序比对、系统进化树分析,结果表明此分离株为RSV GAl亚型。(3)RSV分离株的培养特性研究初步探讨RSV分离株QY-33的相关生物学培养特性：测定RSV感染不同细胞的病毒滴度,发现RSV对A549细胞最敏感；培养过程中分别测定细胞内和培养上清中的RSV病毒滴度,发现细胞病变达90%以上时RSV主要存在于培养上清中；测定用不同温度培养的RSV的病毒滴度,发现RSV的最适培养温度是37℃,32℃也行；初步尝试利用微载体技术培养Vero细胞制备RSV病毒,效果较为理想。本论文从儿童痰样中筛选得到一株RSV分离株QY-33,对其进行分型分析,研究其生长培养特性,并初步建立了生物反应器——微载体培养技术培养Vero细胞制备RSV病毒的工艺,为进一步大规模化培养RSV病毒及疫苗研发奠定了基础。