异补骨脂素和PDG对UVB诱导HDF细胞损伤的保护作用及机制研究

来源 :黑龙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:w7622420
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目的:研究来源于中药补骨脂和杜仲中的两种植物雌激素成分异补骨脂素和松脂醇二葡萄糖苷(PDG)对UVB损伤HDF细胞的保护作用,并探讨异补骨脂素和PDG对UVB损伤细胞ER及下游MAPK信号通路的调控机制,为植物雌激素预防和治疗皮肤光老化提供理论依据。方法:1.构建光老化损伤模型,选择1min、2min、3min、4min、5min、1 0min照射剂量,利用MTT法检测细胞增殖率,确定光损伤的最适剂量;2.浓度为 100μM、10μM、1μM、10-1μM、10-2μM、10-4μM的异补骨脂素和PDG作用于HDF细胞及光损伤细胞,采用MTT法测定细胞增殖率,确定两种药物的无毒性药物浓度和保护作用浓度;3.采用蛋白免疫印迹法和实时荧光PCR法测定异补骨脂素(10μM、1μM、10-1μM)和 PDG(10μM、1μM、10.1μM)对光损伤细胞内COL I、MMP-1的蛋白表达量,同时加入雌激素受体阻断剂(ICI182780)和P38通路阻断剂之后,细胞内ERβ、p3 8、p-p3 8、MMP-1蛋白和MMP-1 mRNA的表达量。结果:1.与空白组比较,UVB照射剂量(3min、4min、5min、10min)的细胞增殖率分别为 92%,80%,69%,50%(p<0.01),5min照射时间的细胞给药处理后仍可恢复正常状态,以此时间确定UVB照射剂量为150mJ/cm2;2.与空白组比较,异补骨脂素(100μM)和PDG(100μM)的细胞增殖率显著降低(p<0.01),可知此浓度对细胞有毒性作用;浓度为10μM、1μM、10-1μM、10-2μM、的异补骨脂素和PDG细胞增殖率明显升高(p<0.01),以此确定无毒性药物浓度;与模型组比较,浓度为10μM、1μM、10-1μM的异补骨脂素和PDG能明显促进光损伤细胞增殖(p<0.01),以此确定保护作用浓度,3.浓度为10μM、1μM、10-1μM的异补骨脂素和PDG明显上调胶原蛋白表达(p<0.01),异补骨脂素(10μM、1μM、10-1μM)和PDG(10μM)能抑制MMP-1蛋白表达(p<0.01);且异补骨脂素(10μM)和PDG(10μM)明显抑制MMP-1的mRNA表达量(p<0.01),同时显著增加ERβ蛋白表达量和降低p-p38蛋白表达量(p<0.01);与植物雌激素组比较,ICI182780(1μM)组明显抑制ERβ蛋白表达量并上调MMP-1的mRNA表达量(p<0.01),同时SB203580(10μM)明显降低MMP-1、p-p38蛋白表达量和MMP-1的mRNA表达量,具有差异统计学意义(p<0.01)。结论:异补骨脂素和PDG能够促进光损伤细胞增殖,促进胶原蛋白及抑制MMP-1蛋白的表达,同时还能上调ERβ蛋白和下调磷酸化p38的表达,进而抑制MMP-1的降解,促进胶原的合成,从而减缓皮肤光老化的发生。
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