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目的: 已经有研究表明，3β-羟基类类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase，3β-HSD)是睾酮合成过程中重要的合成酶。而且近年来，对白藜芦醇的研究十分多，特别是它能抗炎、抗癌和抗氧化等疗效备受关注，但它在生殖方面的研究不多。本研究的目的是观察白藜芦醇是否会特异性抑制3β-HSD来减少雄激素的合成。 方法: 1、将30只SD大鼠分为3组，分别是对照组，50mg/kg和100mg/kg白藜芦醇组，灌胃2天，通过放射性免疫方法(RIA)检测大鼠睾酮的含量。 2、取18只35天龄的SD大鼠，脱臼处死大鼠取其睾丸，分离纯化未成熟的睾丸间质细胞（immature Leydig cell，ILC），通过3β-HSD染色鉴定出其纯度达95％。在24孔板中铺上分离纯化后的ILC，每个孔含0.05×106个细胞。加入0.5mlDMEM∶F12培养基（无酚红）作为培养基，再加入100μM白藜芦醇，1ng/ml黄体生成激素(luteinizing hormone，LH)和2μM下列化合物:8溴-3'，5'环腺苷（8-Bromoadenosine3'，5'-cyclic monophosphate，8BR），22R-羟胆固醇（22R-hydroxycholesterol，22R），孕烯醇酮（pregnenolone，PREG），孕酮(progesterone，P4)和雄烯二酮(androstenedione，D4)处理3小时（其中乙醇作为对照组）。取培养基测5α-雄甾烷-3α，17β-二醇(5α-androstane-3α，17β-diol,DIOL)用放射性免疫方法(radioimmunoassay，RIA)测量。 3、取35天SD大鼠睾丸，制备获取微粒体并测定其浓度。利用所制备的微粒体来检测3β-HSD，细胞色素17α-乙烯羟化酶/20裂解酶(17α-hydroxylase/20-1yase,CYP17A1)和17β-HSD3(17β-hydroxysteroid dehydrogenase)的活性。 1)测定3β-HSD活性: 在活性测试管中加入0.2μM PREG和4000dpm[3H]PREG，0.2mM NAD+,10μg大鼠睾丸微粒体或者50μg人睾丸微粒体，反应90分钟，确定了白藜芦醇的最大抑制浓度。根据白藜芦醇的最大抑制浓度确定反应体系:0.01-20μMPREG和4000dpm[3H]PREG，0.2mM NAD+，10μg大鼠睾丸微粒体或者50μg人睾丸微粒体，白藜芦醇(5μM或10μM)。上述体系在34C孵育1小时，之后加入2ml冰乙醚终止反应。反应结束后，氮气挥干有机相，萃取类固醇。用薄层色谱（氯仿∶甲醇=97∶3，V/V）将类固醇分开，并用Bioscan检测类固醇的放射性，并计算出PREG转化为P4的转化率。 2)测定CYP17A1活性 在活性测试管中加入1μM P4和4000dpm[3H]P4，0.2mM NAD+，10μg大鼠睾丸微粒体或者50μg人睾丸微粒体反应90分钟，确定了白藜芦醇的最大抑制浓度。根据白藜芦醇的最大抑制浓度确定反应体系:0.01-20μM P4和4000dpm[3H]P4，0.2mM NADPH，10μg大鼠睾丸微粒体或者50μg人睾丸微粒体，白藜芦醇（5μM或10μM）。上述体系在34℃孵育1小时，之后加入2ml冰乙醚终止反应。反应结束后，氮气挥干有机相，萃取类固醇。用薄层色谱（氯仿∶甲醇=7∶1，V/V）将类固醇分开，并用Bioscan检测类固醇的放射性，并计算出P4转化为17-羟基孕酮的转化率。 3)17β-HSD3活性 在活性测试管中加入200μM D4和4000dpm[3H]D4，0.2mM NAD+，9μg大鼠睾丸微粒体或者9μg人睾丸微粒体反应60分钟，确定了白藜芦醇的最大抑制浓度。根据白藜芦醇的最大抑制浓度确定反应体系:0.01-20μM D4和4000dpm[3H]D4，0.2mM NADPH，9μg大鼠睾丸微粒体或者9μg人睾丸微粒体，白藜芦醇（5μM或10μM）。上述体系在34℃孵育1小时，之后加入2ml冰乙醚终止反应。反应结束后，氮气挥干有机相，萃取类固醇。用薄层色谱（氯仿∶甲醇=97∶3，V/V）将类固醇分开，并用Bioscan检测类固醇的放射性，并计算出D4转化为睾酮(testosterone，T)的转化率。 结果: 1、白藜芦醇会竞争性抑制3β-HSD的活性，从而抑制了ILC合成雄激素。 2、白藜芦醇抑制大鼠3β-HSD的活性是具有浓度依赖性的，半抑制浓度(halfmaximal inhibitory concentration，IC50)是3.87±0.06μM，同时白藜芦醇也能抑制人3β-HSD的活性，IC50是8.48±0.04μM。 3、当PREG作为底物时，我们发现白藜芦醇是竞争性抑制大鼠3β-HSD的活性。白藜芦醇可能也是竞争性抑制人3β-HSD的活性。 4、通过白藜芦醇急性实验发现，对照组、50mg/kg和100mg/kg白藜芦醇组中大鼠血清睾酮的含量分别是1.304±0.097ng/ml、0.697±0.050ng/ml和0.644±0.058ng/ml，这说明了白藜芦醇会降低大鼠血清中睾酮的含量。 5、我们发现100μM白藜芦醇对大鼠和人的CYP17A1的作用十分微弱(IC50＞100μM)，并且100μM白藜芦醇对17β-HSD3不产生抑制作用。 结论: 白藜芦醇会特异性抑制人和大鼠睾丸间质细胞3β-HSD的活性，从而影响了睾丸间质细胞合成睾酮的功能。