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背景和目的: 胶质瘤是最常见的中枢神经系统的恶性原发肿瘤,具有很高的侵袭性。在成人和儿童中,胶质瘤均能占到中枢神经系统肿瘤的三分之一。根据WHO分级,胶质瘤可以分为低级别胶质瘤(WHOⅠ~Ⅱ级)、间变性星型细胞瘤(WHOⅢ级)和胶质母细胞瘤(WHOⅣ级)。尽管治疗方式如手术和放化疗已经取得了巨大的进步,但是胶质瘤病人的预后依然很差,因此探究胶质瘤的分子发病机制可能帮助解决这一难题。 MicroRNAs(miRNAs)是一类真核生物细胞内高度保守的非编码小分子RNA,约含18-25个核苷酸,并且能通过沉默靶mRNA来起基因转录后调控作用。目前认为miRNAs能够调节人类大多数的蛋白编码基因,这其中包括大量的癌基因、抑癌基因和与放化疗敏感性相关的基因。已有大量研究证明miRNAs在胶质瘤的发生、发展及治疗中发挥重要作用。研究证明mir-133b在舌鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌和结直肠癌中的低表达并且其过表达能够抑制肿瘤细胞的生长,但在胶质瘤中鲜有学者研究和报道。本研究就mir-133b在胶质瘤中的表达情况及其对胶质瘤细胞系增殖、侵袭和凋亡等方面的影响进行研究,为其在胶质瘤诊治中的临床转化提供一定的实验基础。 方法: 收集郑州大学第一附属医院的神经外科胶质瘤手术标本,其中胶质瘤组织100例,相对应的癌旁组织标本29例,正常脑组织9例(脑外伤行部分脑组织切除术的病人)。采用荧光定量PCR检测mir133b的表达水平。并对胶质瘤患者的临床病理参数与mir-133b的表达量进行了相关性分析。随后,我们将mir-133bmimics转染入胶质瘤细胞系U87后,用荧光定量PCR检测转染效率,用CCK8试剂盒检测U87细胞的增殖能力变化,流式细胞仪检测凋亡情况,Transwell实验验证侵袭能力。最后用Targetscan网站预测miR-133的趋化因子和趋化因子受体靶蛋白,并将mir-133bmimics转染进胶质瘤细胞系U87,U251和A172后,检测下游趋化因子和趋化因子受体的变化情况,来验证胶质瘤中mir-133b与趋化因子的靶向关系。随后用荧光定量PCR检测胶质瘤标本中下游趋化因子的表达量,并探讨其与mir-133b在组织中的相关性。 结果: 1.荧光定量PCR结果显示,与癌旁组织和正常脑组织相比,mir-133b在癌组织低表达,差异有明显统计学意义。 2.相关性分析结果表明,在胶质瘤组织中,mir-133b的表达水平和肿瘤大小、WHO分级、KPS评分和增值分数Ki67相关,差异有统计学意义。与低级别胶质瘤相比,高级别胶质瘤有着更低的mir-133b表达水平。 3.CCK8实验证明mimics组胶质瘤细胞生长受到明显抑制,凋亡实验证明mimics组胶质瘤细胞凋亡率明显上升,Transwell实验结果显示mimics组细胞侵袭能力下降。 4.TargetScanHumanmiRNA靶点预测网站进行mir-133b和CCR3、CCR、CCL18相关关系验证,证明三者是mir-133b的下游靶点,转染mir-133b进入胶质瘤细胞系U87,U251和A172后,CCL18、CCR3和CCR7的表达水平受到明显抑制,差异有明显统计学意义。 5.荧光定量PCR检测胶质瘤组织中CCL18表达量,发现其与mir-133b表达量有负相关性,但没有统计学意义。 结论: 1.胶质瘤组织中mir-133b低表达,其表达水平和肿瘤大小、WHO分级、KPS评分和增值分数Ki67相关,和患者的年龄、性别及肿瘤部位无相关性。这些结果提示mir-133b与胶质瘤的发生、发展及转归中发挥重要作用,或许可以成为胶质瘤诊断和分级的分子标志物。 2.TargetScan预测mir-133b可以靶向CCL18、CCR3和CCR7,并且在细胞和组织水平上验证了它们的靶向关系,说明趋化因子和趋化因子受体可能在mir-133b对胶质瘤发生、发展和转归的作用中发挥着重要的作用。 3.将mir-133b转染进胶质瘤细胞系中,肿瘤细胞的增殖力降低,侵袭力降低,凋亡增加,mir-133b可以作为胶质瘤治疗的潜在靶点。