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【研究背景】乳腺肿瘤是临床上的常见病和多发病，其发病率和死亡率逐年呈上升趋势，近年来已跃居女性恶性肿瘤第一位。造成乳腺癌患者死亡的主要原因是肿瘤的转移和复发，迄今没有满意的治疗方法。近年来越来越多的研究表明，SHP-2的激活突变或过度表达可能与乳腺肿瘤的发生和转移密切相关。但其在乳腺癌的发生发展、演化和转移中的作用机制尚未明确。SHP-2属于蛋白酪氨酸磷酸酶家族中的一员，是一个在哺乳动物的组织细胞广泛存在的致癌基因。SHP-2和其它的蛋白酪氨酸磷酸酶一起共同调节细胞的许多重要过程，并且导致了肿瘤的发生。研究表明SHP-2在多种信号转导途径中都起着重要的作用，尤其是在造血细胞的生成及分化中起着十分重要的作用；相对于正常的造血干细胞而言，SHP-2在白血病细胞珠以及成人白血病样本中的表达量都是显著升高的。近年来的研究也证实，在大约50%的努南综合征，髓系白血病，儿童型粒单细胞性白血病及多种实体瘤中发现了体细胞PTPN11基因的错义突变位点；在几乎所有的乳腺癌细胞株中SHP-2均是呈高水平表达的；此外，在乳腺癌伴淋巴结转移的组织中检测到SHP-2表达也是上调的，因此推测SHP-2可能在乳腺癌的发生发展过程中起到了至关重要的作用。然而目前,有关SHP-2与乳腺癌相关性研究很少有报道。【研究方法】为探讨SHP-2激活突变或过表达对乳腺癌MDA-MB231细胞生物学表型的影响，本研究成功构建了SHP-2真核表达载体，转染乳腺癌MDA-MB-231细胞，筛选并鉴定了稳定表达SHP-2的MDA-MB231细胞；检测SHP-2激活突变或过表达对MDA-MB231细胞生长、克隆形成能力、凋亡和侵袭的影响；分析SHP-2对乳腺癌细胞恶性生物学行为影响的可能作用机制。实验结果如下。【研究结果】（1）成功构建了SHP-2野生型及突变型真核表达载体，并经酶切和测序鉴定证实插入序列与设计的完全一致。将其转染进NIH3T3、MDA-MB231细胞，稳定克隆的筛选和鉴定：经Western blot筛选出稳定表达SHP-2的NIH3T3、MDA-MB231单克隆，分别命名为pcDNA3.1、 pcDNA3.1SHP-2-WT及pcDNA3.1SHP-2D61G/+乳腺癌及NIH3T3细胞。（2）SHP-2激活突变或野生型过表达对乳腺癌细胞生长的影响： MTS结果显示，对照组和空载组细胞增殖速度接近，而突变组和过表达组增殖率明显增加，平板克隆和软琼脂克隆形成实验结果表明突变组及过表达组细胞克隆的形成多于对照组细胞。说明转染SHP-2后增加了细胞的二维和三维克隆形成能力。（3）SHP-2激活突变或野生型过表达对乳腺癌细胞粘附和凋亡的影响：粘附实验检测结果显示，突变组或过表达组乳腺癌细胞粘附率高于对照组和空载体组。Annexin-V/PE单染试剂盒检测细胞凋亡结果发现，与对照组和空载体组相比，突变组或过表达组凋亡细胞数均明显减少，说明转染SHP-2增加了细胞的粘附和抗凋亡能力。（4）SHP-2激活突变或野生型过表达对乳腺癌细胞转移能力的影响：细胞划痕法发现，激活突变及过表达组细胞迁移率明显高于对照组和空载体组。Transwell小室检测发现，对照组和空载体组细胞的侵袭率明显低于实验组，说明SHP-2具有增强MDA-MB231细胞体外迁移和侵袭能力的作用。（5）SHP-2激活突变或野生型过表达对乳腺癌细胞在小鼠体内侵袭能力的影响：裸鼠成瘤实验显示，激活突变组的肿瘤侵袭、转移要明显高于空载体组，免疫组化结果显示CD31在突变及过表达组裸鼠肿瘤组织呈高表达，说明SHP-2能促进肿瘤组织的局部浸润，可能与肿瘤新生血管的形成相关。（6）SHP-2激活突变或野生型过表达影响乳腺癌细胞生物学行为可能机制：Western blot检测发现， SHP-2激活突变或过表达细胞中磷酸化AKT/ERK的水平明显高于空载体组，表明转染SHP-2可促进PI3K-AKT及Ras-Raf-Erk途径的活化。【结论】（1）成功构建了SHP-2野生型及突变型真核表达载体；（2）SHP-2激活突变或野生型过表达促进了MDA-MB231细胞粘附、增殖、迁移和侵袭能力，导致裸鼠成瘤能力增强；（3）SHP-2激活突变或野生型过表达对MDA-MB231细胞生物学表型的作用与Ras-Raf-MAPK/PI3K-AKT信号转导途径的激活有关。