辐照对橘小实蝇雄虫肠道菌群的影响及其优势菌种和差异菌种的利用

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橘小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)是一种对果蔬产业造成严重经济损失的钻蛀性害虫。利用昆虫不育技术(Sterile Insect Technique,SIT)来防治橘小实蝇是一种安全有效的科学手段,该技术已经成功应用于多种实蝇科害虫的防治。然而,不育处理会对雄虫造成损伤,影响其存活率、交配竞争力等。本研究利用Illumina HiSeq高通量测序技术分析辐照导致的橘小实蝇雄虫肠道菌群的多样性和丰度的变化,研究具有显著差异的菌种。然后,检测其肠道菌群对橘小实蝇雄虫的蛹重、羽化率、耐压存活率、竞争交配能力及寿命的影响。最后将分离所得的菌种添加到幼虫和成虫饲料中,并评估它们对辐照后橘小实蝇雄虫各生理指标的影响。研究结果如下:1、利用Illumina HiSeq测序分析表明,辐照后橘小实蝇雄虫肠道菌群的全部OTUs和特有OTUs均少于对照组,且辐照组雄虫肠道样品的shannon指数、simpson指数和chao1指数都低于对照组,表明辐照显著降低了橘小实蝇雄虫肠道菌群的多样性和丰富度。同时研究结果表明变形菌门Proteobacteria和厚壁菌门Firmicutes分别占60.376%、24.330%为辐照后雄虫肠道中的优势菌门和次优势菌门,肠杆菌科Enterobacteriaceae和肠球菌科Enterobacteriaceae分别占60.376%和15.694%为优势菌科和次优势菌科,肠杆菌属Enterobacter和漫游球菌属Vagococcus分别占33.840%和12.530%为优势菌属和次优势菌属。另外,米勒氏菌属的威斯康星米勒菌Moellerella wisconse、摩根菌属的摩氏摩根菌Morganella morganii、Cosenzaea属的Cosenzaea myxofaciens均为差异显著的菌种。其中Moellerella wisconse在辐照后,其丰度菌显著升高,而Morganella morganii和Cosenzaea myxofaciens在辐照后的丰度显著降低。2、抗生素处理组橘小实蝇雄虫的蛹重(P=0.001)、耐压存活率(P=0.011)和竞争交配力(P=0.001)等均显著低于对照组;处理组雄虫的头宽(P=0.002)、胸长(P=0.003)、腹长(P=0.003)和翅长(P=0.012)显著小于对照组;但处理组雄虫的羽化率和对照组之间并无显著差异(P=0.397)。另外,抗生素处理组雄虫的寿命时长显著低于对照组。3、利用传统微生物分离培养方法与16 SrDNA基因序列鉴定相结合,成功分离出17株不同菌种。分别为肠杆菌科Enterobacteriacea的肠杆菌属Enterobacter 8株、埃希氏菌属Escherichia 1株、柠檬酸杆菌属Citrobacter 1株、泛菌属Pantoea 1株、摩根菌属Morganella 1株、米勒氏菌属Moellerella 1株、克雷伯氏菌属Klebsiella 1株和普罗威登斯菌属Providencia 1株;链球菌科共获得2个菌属分别为肠球菌属Enterococcus 1株和乳球菌属Lactococcus 1株。肠杆菌属为橘小实蝇肠道菌群中的优势菌属。4、将分离得到的肠杆菌属(8株)以及摩根菌属(1株)和米勒氏菌属(1株),分别添加到幼虫饲料和成虫饲料中。结果表明雄虫的蛹重、成虫大小、耐压存活率和交配竞争力等均具有显著性的增强,但羽化率和飞行能力并没有明显的增强。相反,摩根菌属的Morganella morganii和米勒氏菌属的Moellerella wisconse两株菌均具有显著的负面作用。
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