禽脑脊髓炎病毒分离株全基因序列的测定及VP1蛋白表达

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:linjiachou
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本研究根据Calnek疫苗株序列设计了31条引物,利用反转录聚合酶链式反应,对我国AEV分离株L2Z株的全基因组核苷酸序列进行了测定,同时,采用Bac-to-Bac系统在昆虫Sf9细胞中成功表达了AEVVP1基因,现将结果报告如下: 对我国AEV分离株L2Z株的全基因组核苷酸序列测定的结果表明:该病毒株基因组全长为7059个核苷酸残基,包括494个核苷酸残基的5’非编码区、6402个核苷酸残基的开放阅读框和136个核苷酸残基的3’非编码区及poly(A)尾巴。与已发表的AEV疫苗株1143的基因组序列比较发现,它们之间核苷酸和氨基酸的同源性分别为98%和97.6%,与鸡胚适应株VR的基因组序列比较核苷酸和氨基酸的同源性分别为93.9%和96.4%。结构蛋白(VP1-VP4)中,主要宿主保护性免疫原蛋白VP1氨基酸之间差异较小,L2Z株与疫苗株和鸡胚适应株VP1基因的氨基酸同源性分别为99.3%和98.5%。 重组Bacmid-VP1转染昆虫细胞Sf9后,获得的重组病毒,经SDS-PAGE可见表达的AEVVP1融合蛋白,大小约为35kD。经蛋白纯化用Westernblot检测,初步证实表达的AEVVP1蛋白具有抗原活性。
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