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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)在临床上主要引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、繁殖障碍和呼吸道疾病等多种疾病,主要发病猪为6-16周龄仔猪。根据国际分类方法主要分为PCV2a、PCV2b、PCV2c、PCV2d、PCV2e五个基因型。近年来根据流行病学调查和遗传变异分析表明PCV2流行以及变异的趋势国内目前主要流行的为PCV2d基因型毒株。对于PCV2暂无有效的治疗方法,疫苗免疫被认为是当前最为有效的防控措施。Cap蛋白是PCV2的主要免疫原性蛋白,是近些年研究PCV2相关亚单位疫苗的首选抗原。目前市场上商品化疫苗主要是针对PCV2a、PCV2b基因型疫苗,研究证明PCV2a疫苗对PCV2d毒株能提供较好的保护作用。本研究内容主要研究PCV2b疫苗对目前国内流行的PCV2d基因型毒株是否具有较好的保护作用以及构建表达量更高的重组Cap蛋白,构建表达了 PCV2 Cap蛋白重组杆状病毒并进行了免疫原性研究。主要内容如下:1.通过对疑似PCV2的病猪组织病料进行分离鉴定以及小鼠致病性试验,分离到两株分别为PCV2b、PCV2d基因型的PCV2毒株5123和X46,X46和5123的病毒效价TCID50分别为1×105 5TCID50/0.1ml、1×104.5TCID50/0.1ml。攻毒后PCV2对小鼠肝、脾、肺和肾侵袭力较强,病毒载量较高。X46毒株攻毒后,肝、肾、脾、肺病毒载量较高,显著降低了小鼠的增重,对小鼠有较强的侵袭力;毒株5123各脏器病毒载量均较低,对小鼠侵袭力较弱。2.利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统pFastBacDual表达载体成功构建了重组质粒pFastBacDual-ORF2b、pFastBacDual-ORF2d、多拷贝重组质粒 pFastBacDual-ORF2d 1、pFastBacDual-ORF2d1d2、pFastBacDual-ORF2d1d2d3、pFastBacDual-ORF2d1d2d3d4,利用重组质粒转染获得重组蛋白 PCV2b-Cap、PCV2d-Cap、PCV2d1-Cap、PCV2d-2Cap、PCV2d-3Cap和PCV2d-4Cap 6个重组蛋白,均有较好的反应原性。根据SDS-PAGE和Western-Blot得到多拷贝PCV2d-3Cap蛋白表达量较高,是较好的疫苗候选免疫原。3.利用重组蛋白PCV2d-3Cap、PCV2b-Cap、PCV2d-Cap制作亚单位疫苗,攻毒PCV2毒株X46和P58,进行PCV2b、PCV2d Cap蛋白重组杆状病毒疫苗的小鼠攻毒保护试验。结果显示,各免疫组小鼠组织病毒载量均极显著低于攻毒对照组,各免疫组之间没有显著差异,PCV2b-Cap、PCV2d-Cap亚单位疫苗对攻毒PCV2d毒株的小鼠均有较好的保护作用;综合来看3组亚单位疫苗对PCV2d毒株攻毒的小鼠均有较好的保护作用,尽管PCV2b、PCV2d不同基因型毒株之间抗原性存在一定差异、但不影响PCV2b-Cap、PCV2d-Cap亚单位疫苗对攻毒PCV2d毒株的小鼠提供保护作用;3组疫苗,在免疫剂量相同的情况下,均能提供较好的保护作用,其中PCV2d-3Cap蛋白表达量更高,是较好的PCV2候选疫苗。