将分子印迹技术，结合整体柱高通量、低柱压且简单实用的特点，合成了一种作为预富集柱使用的分子印迹有机整体柱，并在此基础上，结合溶胶-凝胶技术，引入无机组份杂化复合，改进了分子印迹有机整体柱易溶胀、使用寿命短等缺陷。将分子印迹整体柱作为预富集柱与高效液相色谱联用，从而发展了一种在线固相萃取-液相色谱测定复杂基质中痕量药物残留的简单高效新方法。全文共分四个部分，主要工作如下：第一章：评述兽药残留的危害及其检测方法，分子印迹固相萃取及在线固相萃取兽药残留检测的应用，整体柱及杂化整体柱的研究进展。第二章：以恩诺沙星为模板，甲基丙烯酸和甲基丙烯酸羟乙酯为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯和三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯为交联剂，甲苯、十二醇为溶剂，聚乙二醇为分散剂，在不锈钢色谱柱中合成了恩诺沙星印迹整体柱，优化合成条件，并通过整体材料外观，扫描电镜图及动态穿透实验对其性能进行了表征，作为预柱应用于在线固相萃取过程，对牛奶样品中的基质净化效果很好。第三章：制备四环素印迹有机整体柱，并应用于在线固相萃取-液相色谱法测定奶粉中四环素类残留，优化了合成条件，通过扫描电镜图和动态穿透实验对其特异性和选择性进行了表征，并系统研究了在线固相萃取步骤，优化了淋洗溶剂的选择和用量，得到了很好的净化和富集效果。第四章：以恩诺沙星为模板分子，甲基丙烯酸和甲基丙烯酸羟乙酯为功能单体，四乙氧基硅烷和甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷为无机前驱体，甲苯和聚乙二醇-200为致孔剂，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，在不锈钢色谱柱中，制备了一种新的分子印迹有机-无机杂化复合整体柱。采用红外、扫描电镜、热重分析、动态吸附实验和溶胀实验分别表征了整体柱的化学基团变化、形貌、热稳定性、动态吸附特征和溶胀性。将制备的整体柱用作预富集柱，实现了样品离心后直接进样的在线固相萃取-高效液相色谱法分离和测定牛奶中痕量氟喹诺酮类药物残留，获得了较好的净化和富集效果（18.5），平均回收率为89.1-99.2%，精密度为3.55-4.32%，方法检出限小于3.74g kg-1。