二苯乙烯苷对大鼠血管球囊损伤后TNF-α、IL-6、IL-10表达的影响

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目的:本研究通过构建大鼠左侧颈总动脉球囊损伤模型,观察大鼠左侧颈总动脉内膜变化情况和探讨TSG对血管球囊损伤后体内血液和损伤部位血管组织中TNF-α、IL-6和IL-10表达的影响。方法:本实验90只雄性Wistar大鼠取自南华大学实验动物中心,重量约300-400g,将大鼠采用随机化原则分为:假手术组、手术组(球囊损伤左侧颈总动脉)、治疗组(球囊损伤左侧颈总动脉+TSG灌胃),每组30只;假手术组仅分离出左侧颈总动脉;手术组和治疗组构建左侧颈总动脉球囊损伤模型;治疗组采用术前1周开始予以TSG灌胃120mg/kg/d,1次/d。分别于术后第1d、4d、7d、14d和21d取心脏血2ml,每个时间点6只,血液标本离心后取上清液行ELISA检测血清中TNF-α、IL-6、IL-10蛋白表达情况;术后第7d、14d和21d的各组大鼠分别在取出心脏血后立即取左侧颈总动脉球囊损伤段血管标本,标本取出后立即用无菌生理盐水冲洗管腔然后置于甲醛固定及石蜡包埋,最后用于组织切片和HE染色,通过用光学显微镜观察血管内膜变化情况及内膜/中膜面积的比值;术后第7d各组另一半的血管标本进行实时荧光定量PCR和Western Blot检测血管组织中TNF-α、IL-6、IL-10表达情况。结果:1、组织切片HE染色和光镜下通过组织形态学观察血管组织中血管内膜变化情况及内膜/中膜面积比值结果显示:假手术组大鼠左侧颈总动脉内膜光滑,为单层内皮细胞,内弹力膜呈波浪状,中膜以平滑肌细胞为主,外膜为结缔组织。与假手术组相比,建模术后各个时间点,手术组和治疗组球囊损伤段血管组织中术后第1d和4d血管内膜剥脱损坏,但新生内膜尚未形成,内膜/中膜面积比值为0;建模术后第7d、14d和21d球囊损伤段血管组织中可见细胞增殖明显,排列纹理紊乱,细胞外基质明显增加,导致血管新生内膜形成,并逐渐增厚,出现血管内膜增生,管壁增厚,最终导致血管管腔狭窄,说明血管内膜球囊损伤后可以引起血管新生内膜形成;治疗组血管内膜增生、管壁增厚及管腔狭窄程度相对于手术组明显减轻;HE染色光镜下观察结果说明血管内膜增生与血管内皮损伤有关,而TSG能够显著减轻大鼠血管球囊损伤后内膜增生及管腔狭窄。2、ELISA检测术后各个时间点血清中TNF-α、IL-6、IL-10蛋白表达结果显示:假手术组血清中TNF-α、IL-6、IL-10蛋白都有适量表达;与假手术组比较,手术组和治疗组血清中TNF-α、IL-6蛋白表达明显增高(P<0.05),但治疗组较手术组明显降低(P<0.05);术后第7d血清中TNF-α、IL-6蛋白表达最高;与假手术组比较,手术组和治疗组血清中IL-10蛋白表达明显增高(P<0.05),且治疗组IL-10增高得最明显(P<0.05),术后第7d血清中IL-10蛋白表达最高。3、实时荧光定量PCR检测术后第7d血管组织中TNF-α、IL-6、IL-10mRNA表达结果显示:假手术组血管组织中TNF-α、IL-6、IL-10mRNA都有适量表达;与假手术组比较,手术组和治疗组球囊损伤段血管组织中TNF-α、IL-6mRNA表达水平都明显增高(P<0.05),但治疗组明显低于手术组(P<0.05);与假手术组比较,手术组和治疗组球囊损伤段血管组织中IL-10mRNA表达水平增高(P<0.05);且治疗组明显高于手术组(P<0.05)。4、Western Blot检测术后第7d血管组织中TNF-α、IL-6、IL-10蛋白表达结果显示:假手术组血管组织中TNF-α、IL-6、IL-10蛋白都有适量表达,与假手术组比较,手术组和治疗组球囊损伤段血管组织中TNF-α、IL-6蛋白表达明显增强(P<0.05),但治疗组明显低于手术组(P<0.05);与假手术组比较,手术组和治疗组球囊损伤段血管组织中IL-10蛋白表达增强(P<0.05),且治疗组明显高于手术组(P<0.05)。结论:1、血管内膜增生与血管内皮损伤有关,而TSG能够显著减轻大鼠血管球囊损伤后内膜增生及管腔狭窄。2、TSG可以抑制大鼠血管球囊损伤后体内血液和血管组织中TNF-α、IL-6的表达,同时促进IL-10的表达,从而稳定体内促炎/抗炎平衡机制和调节炎症反应。
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