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研究背景Piwil2属于Argonaute蛋白家族，是水母、小鼠和人类等不同生物干细胞自我更新均需要的一类基因。Piwil2在正常人体仅在睾丸和造血干细胞有表达，但在很多肿瘤组织和肿瘤细胞株均有表达。 Chen et al[1]证实，肿瘤干细胞（CSC）和肿瘤干细胞前体细胞（pCSC）特异表达Piwil2蛋白，是干细胞分裂中的重要的调控基因，在干细胞的分化和肿瘤形成和发展中起着重要的作用，肿瘤组织及肿瘤细胞株Piwil2的阳性表达是由于pCSC/CSC存在的缘故。我们的研究也显示，子宫颈癌干细胞特异表达Piwil2[2]，且宫颈癌组织也高表达Piwil2，上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）Ⅱ/Ⅲ可见少量表达，而CINⅠ和正常宫颈上皮未见Piwil2表达。因此，Piwil2作为一种肿瘤睾丸抗原（cancer-testis antigen,CTA），为肿瘤诱导分化治疗提供了高度特异的作用靶点。目的观察Piwil2对3T3细胞生物学行为的调控作用，并深入探讨其分子机制。方法1.构建pIRES2-EGFP-Piwil2真核表达重组质粒。2.利用Lipofectamine2000将pIRES2-EGFP-Piwil2质粒转入3T3细胞，经过G418筛选，建立稳转细胞株3T3-Piwil2细胞。3.利用细胞集落形成实验观察Piwil2对3T3细胞集落形成能力的影响。4.采用细胞直接计数方法观察Piwil2对3T3细胞的增殖能力的影响。5.利用FACS技术分析Piwil2对3T3细胞周期的调控作用。6.利用Western blot检测Piwil2下游相关基因：stat3Bcl2cyclinD1等7.利用裸鼠成瘤实验，观察高表达Piwil2基因后对3T3细胞成瘤能力的影响。结果1.成功构建pIRES2-EGFP-Piwil2真核表达重组质粒。2.建立稳定表达Piwil2基因的3T3-Piwil2细胞，空载体转染细胞3T3-EGFP细胞。3.与3T3-EGFP细胞相比，高表达Piwil2基因的3T3-Piwil2细胞集落形成能力增强，组间差异有统计学意义（p<0.05）。4.与3T3-EGFP细胞相比，高表达Piwil2基因的3T3细胞增殖能力增强，组间差异有统计学意义（p<0.05）。5.细胞周期结果显示，与3T3-EGFP细胞相比，3T3-Piwil2细胞G0/G1期比例下降，S期比例显著升高，组间差异有统计学意义（p<0.05）。6. Western blot结果显示了Piwil2的高表达可以激活Stat3/Bcl-2并且增强Stat/cyclin D1的信号通路。7.3T3-Piwil2细胞裸鼠体内成瘤能力增强，肿瘤体积显著大于对照组，组间差异有统计学意义（p<0.05）。结论1．Piwil2诱导3T3细胞发生恶性转化；2．确定通过激活Stat3增强cyclin D1的信号通路加速细胞分裂以及影响P53失活，上调BCL-2基因，抑制凋亡而发挥分子作用的机制