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黄瓜在我国栽培面积广、种植时间长,是在生产中占有重要地位的蔬菜。霜霉病是黄瓜栽培中最为严重的常发性、流行性卵菌病害,其蔓延速度快、危害严重,一旦发生流行就给种植者造成巨大损失。本研究选用易感种质CCMC和高抗种质PI088的14-3-3蛋白家族基因和其他10个预选抗病基因作为研究对象,通过荧光定量PCR、原核表达融合蛋白、蛋白制备、蛋白纯化、多克隆抗体制备,获得了 CsPI、CsTLP、CsHirp蛋白的多克隆抗体,用Western blot法检测了两个种质间CsHirp蛋白表达的差异,为黄瓜对霜霉病抗性分子机理的研究奠定基础。主要取得以下研究结果:(1)利用实时荧光定量PCR技术,分析霜霉菌侵染叶片前期2个种质间基因的表达情况,结果显示,黄瓜14-3-3蛋白中14-3-3-1、14-3-3-8应与霜霉菌侵染前期抗病胁迫有关,14-3-3-7、14-3-3-11应与霜霉菌侵染后期抗病胁迫有关。CsCupi1、CsNtp27、CsPI、CsPI-F4、CsTLP、CsGS、CsHsirp与霜霉菌侵染前期抗病胁迫有关。(2)成功构建了 pET28a-CsPI、pET28a-CsTLP、pET28a-CsHirp 表达载体,转化入BL21(DE3)中经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测表达出正确的重组蛋白,且CsTLP、CsHirp蛋白为包涵体,CsPI蛋白小部分可溶性表达、大部分为包涵体。对诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度进行优化,确定最适表达条件,大量制备蛋白,pET28a-CsPI重组蛋白最适摇菌温度为37℃、IPTG浓度0.2mM、诱导时间2h,pET28a-CsTLP重组蛋白最适摇菌温度为37℃、IPTG浓度0.8mM、诱导时间8h,pET28a-CsHirp重组蛋白最适摇菌温度为 37℃、IPTG 浓度 0.5mM、诱导时间 4h。pET28a-CsPI、pET28aCs-Hirp重组蛋白分别经镍柱层析纯化后,经SDS-PAGE电泳后切出目的条带,pET28a-CsTLP重组蛋白因无法溶于尿素而没有过镍柱纯化,直接SDS-PAGE电泳后切胶,将切下的胶条送去公司制备多克隆抗体。(3)Western blot检测显示,黄瓜叶片提取蛋白能与制备的CsHirpp阳性血清发生特异性反应,说明多克隆抗体制备成功。Western blot检测表达情况,结果为CCMC中的CsHirp含量很低,Western blot检测不到,PI088中的CsHirp蛋白的初始含量比CCMC中高,随侵染时间的变化含量并无明显变化。