急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是造血系统的一种恶性肿瘤,占成人急性白血病的60%~70%。随着医学技术进步,目前对AML的治疗方案得到不断的发展,但其5年生存率在年轻人中约40%,而对于老年人甚至不足5%[1,2]。因此深入研究其发生发展机制,寻找新的治疗靶点,为AML的精准治疗提供新的途径实属必要。骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是骨髓造血微环境的主要组成细胞,对各类造血细胞及造血干/祖细胞的支持和调节发挥了重要作用。BMSCs通过分泌细胞因子、生长因子、基质蛋白等,参与了白血病的发生、发展[3]。已有一些研究显示,BMSCs相关的一些分子在AML不同阶段的不同表达水平可能与AML的发生、发展及治疗反应和预后有关联[4]。至今哪些BMSCs相关分子起到了关键的调控作用,其对AML细胞的生物学作用是如何发挥的,目前尚不十分清楚。因此深入研究BMSCs相关分子在AML发生、发展中的表达变化规律并阐明其机制,可望为AML患者的诊断和治疗提供新的途径。目的:筛查BMSCs相关分子在AML患者不同疾病阶段中的表达水平及其临床价值;在细胞水平研究BMSCs相关的重要分子对AML细胞的作用。方法:第一部分:通过检索Pubmed、CNKI等数据库,检索到与AML有联系的BMSCs相关分子38个(VCAM1、ICAM-1、CD44、MMP-2、Cx43、IL-6、IL-10、TNF-α、SDF-1、VEGF、HGF、HIF-1α、CCL2等)。收集我中心69例AML患者在初诊、完全缓解(CR)、复发、难治性AML这4个疾病阶段的骨髓样本共151份,非恶性血液病(并除外再生障碍性贫血)患者骨髓样本7例作为对照组,各取EDTA抗凝的骨髓标本2-4ml;分离、培养、收集BMSCs;用Trizol试剂提取BMSCs的RNA。用PCR芯片检测所有样本的38个分子的m RNA表达水平,筛选出与AML发生发展可能有高度特异性的BMSCs相关分子。统计分析筛选出的趋化因子2(chemokine(C-C motif)ligand 2,CCL2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factors,VEGF)在AML患者不同疾病阶段中的表达差异性。第二部分:在体外细胞水平进行进一步验证CCL2、VEGF与AML的关系。对骨髓基质细胞HS-5转染CCL2和VEGF的对照空质粒和过表达质粒;构建转染后HS-5和白血病细胞MOLM13、HL60的共培养体系;检测CCL2、VEGF的不同表达水平对MOLM13和HL60的生物行为学影响;CCK8实验检测共培养体系中白血病细胞的活力、增殖能力;Transwell检测MOLM13、HL60的侵袭能力。结果:1.通过对PCR芯片检测结果的聚类分析,发现在所检测的38个BMSCs相关分子中,CCL2和VEGF在AML不同疾病阶段的骨髓中表达具有最大的差异性,变化具有一致性。初诊时CCL2和VEGF的表达均高于对照组(p<0.05);在CR时其表达水平比初诊时明显降低(p<0.05),与对照组比较均无统计学意义(P=1.000);两者在复发时的表达水平与CR时比较均明显增高(p<0.05);难治性AML患者中CCL2和VEGF的m RNA水平和CR时相比,均明显增高(p<0.05)。2.分别转染CCL2、VEGF的过表达质粒,电泳灰度比及Q-PCR结果均证实转染成功。成功构建体外转染后的HS-5和MOLM13、HL60的共培养体系。HS-5分别过表达CCL2、VEGF时,生长曲线显示共培养体系中MOLM13、HL60的细胞活力均明显增高(p<0.05);Q-PCR结果显示72h共培养体系中MOLM13、HL60细胞增殖为对照组的5.3倍和5.8倍(p=0.005,p=0.002)。当同时过表达HS-5细胞中CCL2和VEGF时,MOLM13、HL60的细胞活力比单独过表达两者时明显升高(p<0.05);MOLM13、HL60细胞增殖为对照组的7.3倍和6.1倍(p<0.001,p=0.008)。Transwell检测共培养体系中HS-5过表达CCL2或VEGF时,MOLM13、HL60的细胞数量增多,侵袭能力增强;HS-5同时过表达CCL2和VEGF时,两者的细胞数量比单独过表达时更多,侵袭能力也更强。结论:1.BMSCs分泌的CCL2、VEGF与AML疾病发展进程关系密切,其在AML的初诊(增高)、治疗后缓解(降低)、复发和难治(再次增高)不同阶段表达具有规律性,对评判疗效和复发难治有一定的参考价值;2.通过体外实验在细胞水平证实BMSCs通过分泌CCL2、VEG能够分别和共同促进AML细胞生长且可能有协同作用。霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma,HL)是一种淋巴系统的恶性肿瘤,好发于男性,多以颈部淋巴结无痛性进行性肿大为主要临床表现,约50%的患者有纵膈包块,约25%的患者有全身症状[1]。HL按病理特点分为经典型霍奇金淋巴瘤(Classical Hodgkin lymphoma,CHL)和结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤(Nodular lymphocytic predominance Hodgkin lymphoma,NLPHL),后者较罕见[2]。随着诊断技术及治疗方案的改进,目前CHL已成为治愈率较高的恶性肿瘤。ABVD方案、Standford V、BEACOPP等方案已在临床治疗CHL中取得了较好的效果。大多数CHL患者经一线治疗可以取得病情的长期缓解甚至治愈。但是目前仍有20%左右的CHL经一线方案治疗失败,或在治疗缓解后出现复发。目前对于复发、难治性CHL(Relapsed or refractory Classical Hodgkin lymphoma,RR-CHL)的治疗仍是临床工作中的难题。如何提高RR-CHL患者的长期生存是需要我们迫切需要解决的问题。目前对于RR-CHL的治疗尚无标准方案,前期一些临床研究显示在大剂量化疗后序贯自体造血干细胞移植(ASCT),对RR-CHL患者的治疗取得了较好的效果[3]。自体造血干细胞移植具有采集过程安全、可重复采集、采集物被肿瘤细胞污染几率较小、移植后造血功能恢复快、患者痛苦小、移植后住院时间缩短、住院费用减少等优点。相比异基因造血干细胞移植,ASCT的并发症及毒副反应相对较小,在淋巴瘤的治疗上有优势。我科也对一些RR-CHL患者实施了ASCT,进一步探索ASCT对RR-CHL的治疗疗效。目的:观察自体造血干细胞移植对复发、难治性的经典型霍奇金淋巴瘤治疗疗效。方法:收集我中心2000年1月至2012年12月期间住院治疗的RR-CHL患者89例,其中45例患者接受了ASCT;而其余44例患者因相关原因未行ASCT,而继续采用化疗或化疗联合受累野放疗(Involved-field Radiotherapy,IFRT)。根据是否进行ASCT,分为ASCT组(n=45)和未移植组(n=44)。ASCT组患者均采用MOED+G-CSF方案动员自体外周血造血干细胞,采用CEAC方案作为预处理大剂量化疗方案。回顾性分析两组患者的治疗疗效。结果:ASCT组所有患者移植后均造血重建,无移植相关死亡病例。两组患者相比较,ASCT组出现消化道反应、Ⅳ级骨髓抑制、粒细胞缺乏伴发热的发生率明显高于未移植组(P<0.05),两组患者在感染及出血症状的发生率无差异(P>0.05),其余并发症的发生率也无明显统计学差异。中位随访54个月(12~156个月),ASCT组复发6例,死亡6例,死亡率13.3%;3年无进展生存率(PFS)为80.0%±6.0%,总生存率(OS)为91.1%±4.2%。未移植组复发8例,中位生存时间:114.00(50.25~176.75)月,中位复发时间:36.00(12.179~59.821)月,死亡21例,死亡率47.7%;3年PFS为59.1%±7.4%,OS为68.2%±7.0%。ASCT组三年OS及PFS均明显优于未移植组(P<0.01)。移植前PET检查评价为完全缓解(CR)的患者,其3年OS为100%,PFS为100%;移植前PET检查未达到CR的患者OS为87.5%PFS为71.9%,移植前PET评价为CR的患者OS及PFS均高于未达CR的患者(P<0.05)。采用Cox逐步回归对预后因素进行分析,显示未采用ASCT、LDH数值高于正常、有结外浸润、有骨髓侵犯是影响DFS的危险因素;而未ASCT、晚期病变以及有骨髓侵犯是影响OS的危险因素。结论:RR-CHL患者进行ASCT后,其3年OS及PFS均明显优于未移植患者,表明ASCT在治疗RR-CHL方案的疗效较好。ASCT治疗RR-CHL所出现的并发症未明显增多,相对安全。在移植前PET检查对疾病缓解情况的评判,对于移植后的长期生存有密切关系。ASCT对于RR-CHL疗效肯定,安全性好,可以作为这类患者的治疗推荐,值得在临床工作中进一步推广。