磺胺对甲氧嘧啶(Sulfametoxydiazine,SMD)是磺胺类药物的一种,其抗菌范围广、副作用小,乙酰化率低,且溶解度高。兽医临床上SMD常用于敏感菌所致的泌尿生殖道感染、呼吸道感染、消化道感染和皮肤软组织感染及作饲料添加剂。但大量或长期使用可使其在动物体内蓄积,造成药物残留,对人类的健康构成潜在危害。胶体金免疫层析技术具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点,因而特别适合于广大基层兽医人员用来大批量检测和大面积普查等,具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景。本试验应用胶体金免疫层析技术,进行磺胺对甲氧嘧啶残留检测方法的研究,以期建立一种快速检测磺胺对甲氧嘧啶残留的方法。1、SMD单克隆抗体的制备及鉴定。本研究将杂交瘤细胞株接种到小鼠体内,采用体内诱生腹水法制备了单抗的腹水。用重氮法和戊二醛法将SMD偶联到牛血清白蛋白(BSA),制成了人工抗原SMD-BSA,并用紫外分光光度计进行了扫描鉴定。腹水经辛酸-硫酸铵法纯化后,单抗蛋白浓度为2.27mg/mL,用包被抗原SMD-BSA对单抗进行质量鉴定,抗体工作浓度为1：10000,抗原工作浓度为1：4000,用确定的最佳抗原抗体工作浓度进行CiELISA测定,标准曲线为Y=0.2962X+0.0684(R2=0.9952),计算出IC50为28ng/mL,LOD为1.91ng/mL,LOQ为8.63ng/mL，通过对其他六种磺胺类药物的交叉反应实验表明该SMD单抗特异性较好。2、SMD胶体金快速检测试纸条的研制。采用柠檬酸三钠还原法制备24nm胶体金,鉴定后用胶体金标记纯化后的单克隆抗体,并将金标抗体吸附在玻璃纤维素膜上。将抗原SMD-BSA和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上组装成试纸条。然后对试纸条的各个条件进行优化,确定了最佳条件。用该试纸条检测SMD标准液,检测限为100ng/mL。试纸条对SQ、SD、ST、SMZ、SDM、SA交叉反应较弱,特异性较好。经测试,不同批次间试纸条重复性较好,4℃条件下可保存10周。3、SMD胶体金快速检测试纸条的初步应用。对牛奶、鸡蛋、蜂蜜样本进行添加回收试验,经检测在牛奶中的药物添加回收率为85.3%～104.6%；鸡蛋中的添加回收率为：81.4%～113.1%；蜂蜜中的添加回收率为73.8%～89.2%。并用处理过的无SMD成份的牛奶、鸡蛋、蜂蜜样本添加SMD标准液,用试纸条进行检测,符合率分别为88%、84%、76%。实验表明,本实验所制试纸条可用于动物食品中磺胺对甲氧嘧啶残留的检测,也为其他兽药残留检测试纸条的研制提供了借鉴。