大豆多肽Lunasin含量测定及活性研究

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大豆中含有丰富的蛋白质和多肽,其中露那辛(Lunasin)是一种重要的功能性多肽。为测定国产大豆中Lunasin的含量,本研究以六种国产大豆为实验材料,采用凝胶电泳法对国产大豆中的Lunasin成分进行分离纯化,得到含有Lunasin的凝胶条带,酶解后利用纳流液相色谱串联轨道阱质谱(NanoLC-Obitrap)平行反应监视法(PRM)分析其中的特异性肽段从而测定Lunasin的含量。测定结果表明:发现国产的二十三种大豆中均含有Lunasin,中黄13中含量为2.24 mg/g;中黄75中含量为3.35 mg/g;中黄30中含量为3.05 mg/g;中黄39中含量为3.31 mg/g;中黄42中含量为2.05 mg/g;中黄48中含量为2.36 mg/g;中黄62中含量为3.10 mg/g;中黄66中含量为2.19 mg/g;中黄70中含量为2.6 mg/g;中黄79中含量为2.88 mg/g;皖豆35大豆中Lunasin含量最高,为4.66 mg/g;郑196中含量为3.40 mg/g;郑9805中含量为3.38 mg/g;邯豆9号中含量为4.09 mg/g;邯豆10中含量为4.21 mg/g;山宁17中含量为3.04 mg/g;化诱542中含量为4.11 mg/g;冀豆12中含量为2.84 mg/g;冀豆18中含量为3.54 mg/g;徐豆8号中含量为3.38 mg/g;徐豆14中含量为2.59 mg/g;黔豆7号中含量为2.03 mg/g;黑河43号中含量为2.87 mg/g。实验结果表明国产大豆中含有丰富的Lunasin。该方法前处理操作简单,重复性好、结果准确,具有较好的线性关系,此方法可用于大豆中Lunasin的含量的测定及筛选富含Lunasin的大豆品种。本研究建立斑马鱼高尿酸模型,对Lunasin进行降尿酸活性评价,除10μM浓度组p<0.05,其余各浓度组p>0.05,提示Lunasin在本实验浓度条件下对斑马鱼尿酸无降低作用。利用斑马鱼高血脂模型对大豆多肽Lunasin降血脂活性进行评价和研究。以高脂饮食喂养斑马鱼幼鱼构建高血脂模型,通过油红O染色检测分析血管中油脂沉积含量,并以斑马鱼尾部血管血脂量为指标对Lunasin的降血脂活性进行评价,通过RT-PCR定量检测多个与血脂合成代谢相关基因的表达来分析Lunasin降血脂的可能作用机制。检测了HMGCR、CYP7A1、LDLR、MTP、FSA这5个基因在正常斑马鱼、高脂喂养斑马鱼、Luasin浸泡处理斑马鱼和大豆提取物处理的斑马鱼中的mRNA相对表达。实验结果表明Lunasin可能主要通过参与胆固醇代谢来调节血脂,通过上调肝细胞表面的LDLR受体和下调胆固醇-7ɑ-羟化酶(CYP7A1)的转录水平从而降低血脂水平。
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