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本博士论文针对国内外植物疫害生物急需相应检疫检验技术体系和快速检测试剂(盒)的现状，选择严重影响农业生产安全的柑桔溃疡病菌、亚洲柑桔韧皮部杆菌、小麦矮腥黑穗菌和马铃薯种传病毒等为靶标疫害微生物，依据专有基因序列设计特异性引物／探针，利用简易快速、高效排抑的膜分离样品制备方法，建立了靶标疫害微生物特异、准确的免疫诊断和PCR检验检疫技术体系，并基于独创的生物大分子稳定剂创制新型固相化分子诊断试剂盒，并用于近缘种类的甄别、田间病害早期诊断和疫情动态监测。对于增强我国防范农业植物外来疫害入侵和扩散的检疫监控能力，提高我国农业植物疫害生物检验检疫技术整体水平，确保中国农产品的安全生产，促进中国农产品顺利出口具有重要意义。 (1) 柑桔溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri,Xac)引起的柑桔溃疡病是严重影响全世界柑桔生产的重大检疫性病害。本研究选择Xac独有蛋白基因序列分别设计筛选出特异性引物对(JYF5／JYR5)，建立了柑桔溃疡病菌常规PCR检测技术，经反复测试结果表明能够稳定地特异性检出柑桔组织表面所带溃疡病菌的DNA靶带(413 bp)。而对柑桔叶面附生的非致病性黄单胞菌、野油菜黄单胞菌等近缘种以及健康柑桔样品都不能扩增出该靶带；靶细菌DNA检测下限为1.56 pg／μL，细菌悬浮液检测下限为10 cfu／μL；在不同PCR仪及各种控温方式下都能稳定地扩增出特征性靶带，说明该检测技术已经成熟稳定。以插入Xac靶序列片段的重组质粒DNA或溃疡病菌菌液或显症材料作为阳性对照样品，以盆栽柑桔实生苗作为阴性对照样品，利用建立的PCR技术和固相化检测试剂盒对南方柑桔主产区的柑桔叶片、枝条和果实样品统一制样进行了实际检测，结果与各地实际病害发生一致。 (2) 柑桔黄龙病(Citrus Huanglongbing，HLB)由难以人工培养的韧皮部杆状细菌所引起，是严重影响世界柑桔产业的重要检疫性细菌病害之一。该病可以通过罹病接穗嫁接、带菌柑桔木虱(Diaphorina citri)取食健株新梢以及罹病柑桔种苗远距离传播。利用克隆测序的16S rDNA核糖体蛋白基因序列片段比对分析，设计靶序列特异引物对和荧光探针，建立并优化了柑桔黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus)的常规PCR、荧光染料和TaqMan探针定量PCR反应体系，分别测评了检测特异性、灵敏度以及准确度，结果表明TaqMan探针PCR对于靶标病原菌的检测特异性最强，但检测成本较高；SYBR Green Ⅰ染料法的检测灵敏度最高，常规PCR、TaqMan探针法、SYBR Green Ⅰ染料法对靶片段序列DNA的检测下限依次为43.90fg／μl、4.39fg／μl、0.44fg／μl，定量PCR检测灵敏度较常规