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目的:microRNA是一类新发现的具有调控功能的小RNA分子,通过调节基因的表达在生物发育、脂肪代谢、细胞分化、增殖和凋亡等过程中发挥重要作用。而在人类肿瘤中某些miRNA表达水平异常或发生突变,提示这类小的核酸分子可能发挥类似癌基因或抑癌基因的作用。本实验旨在通过微阵列技术分析miRNA在六种类型肿瘤细胞中的表达差异,然后对某一特殊miRNA在肿瘤发生发展中可能功能进行深入研究,为进一步探讨miRNA在肿瘤中发挥的作用及其在肿瘤治疗中的应用提供理论依据和实验基础。方法:1.利用miRNA表达谱芯片检测六种肿瘤细胞株:HeLa、K562、ES-2、MCF-7、HT-29和A549中miRNA表达差异,并用RT-PCR、Northern blot进行验证。2.利用反义核酸技术封闭ES-2和K562细胞中高表达的miR-17-5p,利用MTT法和细胞计数检测细胞的生长变化。3.用流式细胞术检测细胞周期改变,用TUNEL检测是否引起细胞凋亡。4.mRNA表达谱芯片检测封闭miR-17-5p后ES-2细胞mRNA表达水平变化,利用生物信息方法预测miR-17-5p可能的靶基因,分析封闭miRNA后细胞生长变化可能的作用机制。结果:1.miRNA表达谱芯片检测到六种肿瘤细胞中115种miRNA存在明显差异,91种miRNA没有明显差异。其中,miR-21在六种肿瘤细胞表达水平均较高;miR-125b表达水平均较低;miR-17-5p和miR-20a呈集簇表达,在ES-2细胞中的表达水平高于其它细胞:let-7不同亚型在六种细胞系中表达水平较低;MCF-7和HeLa中miRNA表达谱聚为一类。2.Northern blot、RT-PCR方法验证与miRNA表达谱芯片检测结果基本一致。3.miR-17-5p被封闭后,ES-2细胞生长受到抑制,TUNEL检测到细胞发生凋亡;K562细胞生长受到抑制,FACS检测细胞发生S期阻滞。4.mRNA表达谱芯片检测到miR-17-5p被封闭后ES-2细胞内mRNA表达水平发生变化。其中E2F1、CHAF1A、COX7A2L、HECA、VPS26、YES1是生物信息方法预测到的靶基因,而且表达水平发生变化。5.miR-17-5p可能通过负性调控E2F1参与细胞凋亡和细胞周期调控。结论:1.不同肿瘤类型中miRNA的表达存在差异。2.miR-17-5p可能通过调控凋亡或细胞周期等过程参与肿瘤的发生发展。