【摘 要】
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利用卡那霉素抗性基因(Km)构建了质粒pDA,获得用于线状巴豆甜菜碱还原酶基因caiA缺失DNA分子.转化带有卡那霉素抗性基因的5.2kb线状DNA分子到大肠杆菌JM83、BL21(DE3),借助于
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利用卡那霉素抗性基因(Km)构建了质粒pDA,获得用于线状巴豆甜菜碱还原酶基因caiA缺失DNA分子.转化带有卡那霉素抗性基因的5.2kb线状DNA分子到大肠杆菌JM83、BL21(DE3),借助于体内DNA同源重组,定向敲除了大肠杆菌中的巴豆甜菜碱还原酶编码基因caiA.经遗传稳定性实验、PCR以及Southern鉴定,表明所获得的JM83转化子22号和BL21(DE3)转化子4号确为caiA基因缺失突变株;酶活分析结果也表明,22号和4号转化子均丧失了巴豆甜菜碱还原酶活性.另一方面,为了构建能够以巴豆甜菜碱为底物酶转化法生产L(-)肉碱的基因工程菌,进行了caiE基因高效表达的探索工作.在降低诱导剂的含量和降低诱导温度都无法表达出有活力的CaiE蛋白的情况下,尝试了几种包涵体变复性的方法来处理CaiE包涵体蛋白并且得到了可溶性的CaiE蛋白.
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