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第一部分Ipilimumab的药代动力学研究目的:本文旨在研究抗体药物ipilimumab在临床前小鼠模型C57BL/6J小鼠,CTLA4人源化小鼠以及CTLA4人源化荷瘤小鼠中的药代动力学行为。方法:通过静脉注射(i.v.)和腹腔注射(i.p.)两种给药方式给不同模型小鼠ipilimumab。采用建立的生物素-亲和素酶联免疫吸附方法(BA-ELISA)测定小鼠血浆中ipilimumab的浓度,并使用Phoenix WinNolin软件分析其药代动力学参数。结果:当以腹腔注射的方式分别给予C57BL/6J小鼠0.3,1.0,10.0 mg/kg剂量的ipilimumab时,随着给药剂量的增加,Cmax和AUC0-last呈现增加的趋势。此外,对于不同模型的小鼠,当腹腔注射10.0 mg/kg的剂量时,其药动学参数存在差异:荷瘤CTLA4人源化小鼠(12925.7 h*μg/mL)中 AUC0-1ast 显著高于野生型 C57BL/6J 小鼠(9385.7 h*μg/mL)和 CTLA4人源化小鼠(7691.6 h*μg/mL)。然而,C57BL/6J小鼠(175.5 h)中的t1/2显著长于CTLA4人源化小鼠(26.7 h)以及CTLA4人源化荷瘤小鼠(27.0h)。当静脉注射3.0 mg/kg ipilimumab于野生型C57BL/6J与CTLA4人源化荷瘤小鼠时,其药动学参数Cmax在人源化荷瘤小鼠(95.8 ug/mL)显著高于野生型C57BL/6J小鼠(31.6 ug/mL);此外,野生型C57BL/6J小鼠(462.3 h)中的t1/2显著长于CTLA4人源化小鼠(26.8 h),并且ipilimumab在CTLA4人源化小鼠中的清除率(0.98 mL/h/kg)明显高于野生型C57BL/6J小鼠(0.48 mL/h/kg)中的清除率。这些结果表明ipilimumab与CTLA4的特异性结合可能会影响ipilimumab在体内的清除率。结论:抗体药物ipilimumab在不同小鼠模型中的药代动力学参数存在差异。此外,由靶向介导的抗体药物处置(TMDD)相关的机制还需进一步研究。第二部分miR-34a突变体的抗肿瘤活性及其药代动力学研究目的:miR-34a具有较强的临床抗肿瘤活性,但由于其具有较强免疫相关不良反应,而被终止于Ⅰ期临床试验。因此,本研究旨在探究miR-34a突变体的抗肿瘤活性及其药代动力学。方法:对miR-34a-5p的3’末端的碱基进行单点突变,通过CCK-8实验和异种移植瘤实验探究miR-34a突变体的抗肿瘤活性。采用转录组测序和双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-34a突变体的靶基因。此外,我们建立了用于定量测定miR-34a的qPCR方法,并将其应用于miR-34a体内药代动力学研究。结果:当miR-34a的3’末端8号位点的G突变为A时即突变体MRX21,在癌细胞中具有出最强的抗肿瘤活性。MRX21在人结直肠癌细胞株HCT 116、HCT-8、人胃癌细胞SGC-7901中的IC50 值分别为 1.727±1.10nM、13.53 ± 1.07 nM 和 10.66±1.08 nM。裸鼠异种移植实验的结果显示MRX21对肿瘤生长具有显著抑制作用。此外,经MRX21处理的HCT116细胞中,表达显著下调的基因有59个和上调的基因有99个。我们通过qPCR验证了 9 种下调基因,包括 AURKA,AURKB,CDK1,CKS2,PDGFA,PLK1,JAK2,KIF11和PTCH1。此外,miR-34a的药代动力学研究显示,MRX21在小鼠体内的AUC0-last为 68132.61±17081.65 h*ng/ml,MRT0-last为 4.67±0.5 h。结论:MRX21 具有较强的体内外抗肿瘤活性,此外,其可通过调控多种致癌基因发挥抗肿瘤作用。