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研究目的:用三七透明质酸钠凝胶(简称“三七凝胶”)对家兔椎板切除手术模型进行局部干预,从对炎症因子Cox-2及成纤维细胞增殖与凋亡影响的角度探讨该方法对预防腰椎术后硬膜外瘢痕形成的相关机理。
研究方法:制作家兔L6椎板切除模型,按照完全随机方法分为生理盐水组(SA)、三七浓缩液组(SQ)、透明质酸钠组(SH)、三七透明质酸钠凝胶组(SS),每组24只大白耳系家兔,分别在硬膜囊周围滴注生理盐水、三七浓缩液、透明质酸钠、三七透明质酸钠凝胶各0.5ml,各组术后1、2、4、8周每组随机处死6只后取材,经免疫组织化学或原位杂交技术染色后观察相应时间点各组Cox-2、TGF-β1、CTGF、Caspase-3的表达情况以及经TUNEL技术观察成纤维细胞凋亡情况。
研究结果:
1.术后1、2周时SS组硬膜外瘢痕中Cox-2mRNA的表达较其他各组显著减少(P<0.05),其他各组之间无明显差异(P>0.05)；4组2、4周时较1周时及SA组、SQ组、SH组4周时较2周时均显著减少(P<0.05),SS组2周和4周时无明显差异(P>0.05)。
2.术后1周时CTGFmRNA的表达SQ组、SH组、SS组较SA组及SS组较SQ组、SH组均显著减低(P<0.05)；2周时SS组较其他各组均低(P<0.05),其他各组之间无明显差异(P>0.05)；SA、SH组2、4周及SQ组4周较1周时均显著减少(P<0.05),其他各组各时间点之间无明显差异(P>0.05)。
3.术后1周时硬膜外瘢痕中TGF-β1抗体的表达SQ、SH、SS组较SA组及SS组较SQ、SH组均显著减少(P<0.05),2周时SS组较SA、SQ、SH组均显著减少(P<0.05),其他各组之间无明显差异(P>0.05)；各组2周与1周时比较均无显著性差异(P>0.05),4周较1、2周时均明显减少(P<0.05)。术后
4周时各指标各组之间无显著性差异(P>0.05)。
4.经Tunel染色观察到,SS组硬膜外瘢痕中成纤维细胞凋亡在2周、4周、8周三个时间点均高于其他组(P<0.05),以4周时显著(P<0.01)。并且SA组、SQ组第4、8周时较第2周都明显增高(P<0.05),而第4周和第8周之间无明显差异(P>0.05),SH组和SS组各个时间点之间无明显差异(P>0.05)。
5.术后2周时硬膜外瘢痕中Caspase3表达SS组均较其他组高(P<0.05),SQ.组较SA组高(P<0.05)；4周时各组之间没有明显差异,无统计学意义(P>0.05),8周时SQ组较SA组、SQ组显著增高(P<0.01),较SH组增高(P<0.05),有统计学意义。并且SA组第4、8周较第2周时明显增高(P>0.05),第4周和8周之间无明显差异(P>0.05)；SQ组各个时间点之间无明显差异(P>0.05)；SH组第4、8周较第2周、第8周较第4周都明显增高(P<0.05),SS组第8周较第2、4周都明显增高(P<0.05)。
研究结论:
1、三七凝胶较对照组能明显降低硬膜外瘢痕中Cox-2、CTGF、TGF-β1的表达,表明其可以明显抑制术后预防硬膜外瘢痕形成中炎性反应及成纤维细胞增殖,其预防硬膜外瘢痕粘连的机理可能与此有关。
2、三七凝胶能显著促进Caspase-3的表达,使其表达峰值提前、延长,促进成纤维细胞凋亡,其预防硬膜外瘢痕粘连的机理可能与此有关。