丙肝病毒非结构蛋白3基因体外细胞的诱导表达及其转基因小鼠模型的建立

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该研究利用PCR技术从含中国人丙肝病毒NS3 cDNA的pBNS3载体中扩增出了NS3区(约690bp),并引入了翻译起始密码(ATG),然后与克隆载体pGEM-T重组,经核苷酸测序证实.再与真核表达载体pMSG重组为具有正确阅读框架的重组表达载体pMSG-NS3;将大量制备pMSG-NS3经去细菌内毒素等纯化处理后,通过磷酸钙共沉淀的方法转染CHO、Hela、7721(我校基础部病理教研室建株的一种肝癌细胞品系)细胞,再利用糖皮质激素地塞米松(终浓度分别为3×10<-7>、3×10<-8>M)诱导表达不同时间后,收集细胞,用ELISA及蛋白印迹(Western-blot)方法进行蛋白表达的检测证实.该研究所构建的NS3重组载体及NS3转基因C57小鼠品系,一方面为研究NS3区在体内丙肝病毒致病的作用提供了动物模型;另一方面,将为下一步研究NS3与HCV中其它非结构蛋白在体内的协同作用机制提供了前提条件和有益的对照.
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