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第一部分肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合姜黄素对膀胱癌T24细胞抑制作用研究 目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor(TNF)-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)是TNF超家族的成员之一，可与死亡受体结合诱导细胞凋亡。和TNF家族的其它成员不同，TRAIL可诱导多种肿瘤细胞的凋亡，而对正常细胞并无细胞毒性。但并不是所有肿瘤对TRAIL诱导的细胞凋亡均敏感，膀胱肿瘤T24细胞就是其中之一，本研究就是探讨TRAIL联合姜黄素对膀胱癌细胞株T24的抑制作用。 方法:CCK-8法测定姜黄素、TRAIL、及TRAIL联合姜黄素作用于T24细胞后48h的生存率，用TUNEL检测药物作用24h后的细胞凋亡，在同一时间点，用流式细胞技术测定细胞的凋亡率。 结果:(1)18ng/ml TRAIL及36ng/ml TRAIL对T24细胞的抑制作用不明显，作用48h后生存率分别为(88.33±3.54)％、(83.11±8.58)％。3ug/ml姜黄素则对T24细胞有一定的抑制作用，细胞的生存率降低到(75.49±5.40)％。姜黄素联合TRAIL的方法对T24细胞的抑制作用最强，姜黄素分别联合18ng/ml TRAIL及36ng/ml TRAIL作用48h后生存率分别降低到(51.56±7.68)％、(43.65±9.71)％。与单用TRAIL组比较差异具显著性意义，P＜0.01。 (2)TRAIL对T24细胞不敏感，而姜黄素对T24细胞有诱导凋亡作用，18ng/ml TRAIL、36ng/ml TRAIL及3ug/ml姜黄素作用24h后细胞凋亡率分别为（8.33±1.53）％、（9.06±1.84）％、(28.04±3.67)％。18 ng/ml TRAIL及36ng/ml TRAIL联合3ug/ml姜黄素作用24h后细胞凋亡率分别为(53.69±8.19)％、(68.26±11.97)％。两者比较，联合用药诱导凋亡作用更强，差异具有显著性意义，P＜0.01。 (3)18ng/ml TRAIL及36ng/ml TRAIL联合3ug/ml姜黄素明显增强诱导T24细胞凋亡作用，在作用24h后凋亡率明显高于单独用姜黄素或TRAIL组，差异具有显著性意义，P＜0.01。 结论:TRAIL与姜黄素联合应用较单独用TRAIL或姜黄素能明显增强对膀胱癌T24细胞的抑制作用和诱导凋亡作用。 第二部分肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合姜黄素诱导膀胱癌T24细胞凋亡机制的研究 目的:探讨TRAIL与姜黄素联合应用诱导膀胱癌T24细胞凋亡的作用及其机制。 方法:用CCK-8法分别检测3ug/ml姜黄素、18ng/ml TRAIL、36ng/ml TRAIL及3ug/ml姜黄素分别与18ng/ml TRAIL、36ng/ml TRAIL联合作用于膀胱癌T24细胞48h后细胞的生存率。用Q-PCR方法检测肿瘤细胞DR4 mRNA、DR5 mRNA的表达。用Western blot检测药物作用于T24膀胱癌细胞2h后ERK、AKT总蛋白水平及其磷酸化蛋白表达水平，作用24h后凋亡相关蛋白pro-Caspase-3、PARP、Bcl-2、Bax、XIAP、Mcl-1、cIAP1的表达水平，用NF-κB-Luciferase报告基因检测不同加药组对NF-κB转录活性水平的影响。 结果:(1)3ug/ml姜黄素、18ng/ml TRAIL、36ng/ml TRAIL及3ug/ml姜黄素分别与18ng/mlTRAIL、36ng/ml TRAIL联合作用于膀胱癌48h后，姜黄素组及联合用药组细胞增殖均表现出抑制作用，而TRAIL和姜黄素联合应用组的抑制效果较单独用药组明显增强，P＜0.01。 (2)3ug/ml姜黄素、18ng/ml TRAIL、36ng/ml TRAIL及3ug/ml姜黄素分别与18ng/mlTRAIL、36ng/ml TRAIL联合作用于膀胱癌24h后，DR4 mRNA及DR5 mRNA均呈明显表达，其中TRAIL联合姜黄素组DR4 mRNA及DR5 mRNA的表达与对照组及单用姜黄素或TRAIL组比较无统计学差异。 (3)3ug/ml姜黄素、18ng/ml TRAIL、36ng/ml TRAIL及3ug/ml姜黄素分别与18ng/mlTRAIL、36ng/ml TRAIL联合作用于膀胱癌24h后，联合用药组pro-caspase-3蛋白表达降低，Mcl-1、XIAP、cIAP1、Bcl-2蛋白表达降低，而姜黄素组及联合用药组Bax蛋白表达增加;3ug/ml姜黄素、18ng/ml TRAIL、36ng/ml TRAIL及3ug/ml姜黄素分别与18ng/mlTRAIL、36ng/ml TRAIL联合作用于膀胱癌T24细胞2h后，联合用药组ERK、AKT总蛋白表达无变化，但其磷酸化蛋白p-ERK、p-AKT表达量下降，姜黄素及联合用药可抑制NF-κB转录活性。 结论:TRAIL联合姜黄素作用于膀胱癌T24细胞后，可以明显增强18ng/ml TRAIL及36ng/ml TRAIL对细胞的增殖抑制作用，姜黄素联合TRAIL可以下调抗凋亡蛋白Mcl-1、Bcl-2、XIAP及cIAP1的表达水平，减少pro-Caspase-3的表达，增加Caspase-3的活性，抑制PI3K-Akt及ERK信号通路。姜黄素可能通过上调促凋亡蛋白Bax的表达，抑制NF-κB信号通路，从而提高膀胱癌T24细胞对TRAIL的敏感性，TRAIL联合姜黄素的应用可以增强对膀胱癌T24细胞的抑癌效应。