内皮素（endothelin，ET）是主要分布于心血管系统的一类活性多肽，有强烈的缩 血管作用。ET家族中ET-1在心血管系统含量最高，内皮细胞、心肌细胞和血管平 滑肌细胞等均能够合成ET-1。ET-1的生物学效应由ETA、ETB受体介导产生，心肌 及血管平滑肌的ET受体主要为ETA亚型。ET-1与心肌缺血/缺氧关系密切。缺氧 能够强烈刺激ET-1表达，而ET-1增加不仅可能强烈收缩冠脉加重心肌缺血，还可 能直接产生缺血与致心律失常效应。众多研究报道ET受体拮抗剂可减少心肌梗塞 面积、改善缺血心肌功能，但有关急性缺血性心律失常的观察甚少，对于ET-1促 进抑或抑制缺血性心律失常的发生尚有争议，其作用机制如何尚不明确。为了探明 ET-1在急性缺血性心律失常发生中的作用并探讨其作用机制，本工作在整体猫和大 鼠应用ET受体拮抗剂和自行设计的ET-1反义寡核苷酸以阻断内源性ET-1的作用， 观察急性缺血性心律失常的发生；在培养的心肌细胞观察ET受体拮抗剂对缺氧所致胞浆钙浓度变化的影响。此外，还观察了ET受体拮抗剂和ET-1反义寡核苷酸对 缺血早期心肌（缺血30min）超微结构的影响，以及对缺氧所致培养心肌细胞损伤 与细胞凋亡的影响。 一、实验模型与方法 1．结扎麻醉猫左冠状动脉前降支（LAD）起始段造成急性心肌缺血，于结扎后 l～2min内向LAD内注射ETA受体特异性拮抗剂BQ610，观察60min缺血期内 血压、心率变化以及心律失常，并观察缺血30min心肌的形态学变化（HE染色 结合偏光观察，Nagar-Olsen染色，透射电镜观察）。根据心律失常发生率、心律 失常评分以及分类计数综合评估心律失常严重程度以判断ET在急性缺血性心 律失常发生中的作用。 2．设计合成 4种（AS1～AS4）硫代修饰的 ET-1mRNA反义寡核苷酸（AS-ODN）， 并合成AS4的正义序列（S4）和随机序列（scrambled-AS4）以作对照。在麻醉 大鼠LAD闭塞前2h静脉注射ODN，观察其对血浆ET-1浓度、急性缺血性心 律失常以及缺血30min心肌超微结构的影响。 ．二一 博士学位论文 怠住缺血性心律失常的内皮11机幻 拘 耍C 3．原代培养乳允。Mte胞，于 3％Ons％CO。37C孵箱中孵育造成缺氧，观察BQ610 对缺氧所致培养一胞上清浚LDH和SOD活力改变以及细胞凋亡（W法） 的影响．以cJ荧光棵针＊IUo习负载细胞，激踞聚焦显雌下观察测定。C肌 细毗氧前后厂山；荧光强度变化及 BQ610的干预效应．K利；N定所用缺氧 模型为：灌lie氧触咸细胞k氧，缺氧液采用 95％N＋5％COZ龄弛和的 DMEM溶液，并在临用前加入低亚硫酸钠（NaS。O4）使其终瞰为lmM． 二、主要结果 （一）ET。受休桔抗剂 B061对猫急性缺血性心律失常和缺血心肌形态学的影响 1．猫Uo结4敝严重缺血性，H律失常，室性异位搏动（VEB）频发、龈，室 用＊T）时间长这6肚18C，1尼固室蜘＊F）死亡，心律失常评扒＊s H．56ic．39， VEB总数高达 84肚l47．BQ6101．5，3．0，6．0 nmo峋剂量蛐性地账VT、VF 发生率，减少各类心律失常数量，账AS．BQ610 6．0 nmo呐组＊ ．K猫无一 只发生vT或VF，AS叫到，·C律失常总数降至15肚3不 与对照组差异非常显 著． 2．猫缺血301llln心脯栅影示部分cM光现象消失等心肌变性特征，BQ610 处理组心M光现象基本正常．N明Olsen染色：正常心肌染色阴性；缺血对 照组见束状或片状鲜红色阳性颇区，示心肌变性门性朋强度：…）； BQ6101．5 nmollkg组仅见砒小灶性阳性kB区（＋～－－XBQ610 6．0 nmo呐 组基本阴性（o． 3．猫缺血3ha。川的趋微结构出现，0肌细胞肿胀，肌原纤维断裂，闰盘处变性，线 粒体明显肿胀、咯断裂，血管内皮细胞肿胀严重、吞仗小泡明显减少等病理改 变；网61o．5 nmo呐组腑结构有改善，6刀Wg组胀结构胁正常． （二）ET叫 Illlt＂A反义寡核音田对大巨急性缺血性心律失常与缺血心肌超微结构的 影响 1．大巴ItD闭塞诱发急性缺血性·0律失常，7～12Inin达到高峰．LAD闭塞前血浆 ET14k为7．66to．12 p仰．LAD闭塞后10Inin和3恤时，M浆ET－14度 均显著高于闭塞前门．34