【摘 要】
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本研究利用重叠PCR技术,对H9N2亚型Y280亚系流感病毒A/Chicken/Jilin/DH102/2012(H9N2)(DH102)的HA受体结合区220-loop中的226位和227位进行了氨基酸置换,应用反向遗传技术拯
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本研究利用重叠PCR技术,对H9N2亚型Y280亚系流感病毒A/Chicken/Jilin/DH102/2012(H9N2)(DH102)的HA受体结合区220-loop中的226位和227位进行了氨基酸置换,应用反向遗传技术拯救出野生型未突变病毒Re DH102以及3株定点突变病毒—Re DH102/L226Q、Re DH102/L226M、Re DH102/Q227M。固相酶联受体结合实验结果显示,HA226L使病毒偏嗜结合人型受体;HA226Q使病毒偏嗜结合禽型受体;HA226M使病毒与受体的结合能力介于HA226L和HA226Q之间,且与人型受体结合能力高于禽型受体;HAQ227M突变不会改变病毒的受体偏嗜性,但可影响病毒与某些种类人型受体的结合能力。无论是HA226位和227位突变病毒,还是未突变病毒,均能与鸡、BALB/c小鼠以及人的肺组织结合,但组内无显著差异。细胞间接免疫荧光和流式检测结果表明,与未突变株Re DH102相比,Re DH102/226Q、Re DH102/227M与高表达禽型受体的CEF细胞、A549细胞的结合能力显著提高(p<0.05);Re DH102/226M与A549细胞的结合能力显著提高(p<0.05);但突变与未突变病毒与人型和禽型受体含量相当的MDCK细胞的结合能力无显著差异。病毒复制动力学实验结果表明,HA226位为L和M的病毒在MDCK细胞上的增殖能力差异不显著;HA226位为Q的病毒增殖能力显著降低(p<0.01),且空斑形态变小;HA226位为L、227位为M的病毒增殖能力显著降低(p<0.05),但空斑形态未发生改变。以上研究结果表明,H9N2亚型流感病毒HA受体结合位点226位氨基酸显著影响病毒的受体亲和能力,而HA227位对病毒的受体偏嗜性无影响,但对病毒的受体结合能力有一定影响。HA226位和227位突变可以影响病毒的细胞嗜性和增殖能力。
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