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结核病依然是人类生命健康的严重威胁之一,其罪魁祸首是结核分枝杆菌(MTB)感染。巨噬细胞作为机体感染免疫的第一道防线,在识别、吞噬入侵的MTB后,启动复杂的免疫应答机制;但作为典型的胞内菌,MTB可以实现在巨噬细胞内增殖及免疫逃逸。二者之间的对抗机制尚不清楚。 本研究利用MTB标准有毒株H37Rv,感染诱导分化成巨噬细胞的人单核细胞系THP-1;并采用RNA-Seq高通量测序技术,追踪感染8h和24h后巨噬细胞及其外泌体中的转录组动态变化,构建MTB相关功能信号网络。 结果显示MTB感染8h后,巨噬细胞通过TLRs、NOD2和CD14等PRRs识别MTB细胞壁组分和核酸组分,启动NF-κB通路释放炎症因子,并且使巨噬细胞内吞、募集、趋化和迁移等免疫相关功能明显活化;而干扰素通路的活化,则有效促进了巨噬细胞对MTB的裂解和复制抑制作用。这说明MTB感染成功激活了巨噬细胞的天然免疫功能。 在MTB感染24h后,干扰素通路及天然免疫相关功能进一步活化,而NF-κB通路介导的炎症反应有所缓解。此外,巨噬细胞的抗原提呈能力明显增强,且Tec激酶通路激活介导的细胞因子释放,显示此时的巨噬细胞具有诱导T细胞和淋巴细胞分化发育的功能。这些结果提示MTB感染24h后,巨噬细胞很可能已经可以启动宿主的获得性免疫功能,而不仅仅停留在天然免疫。 与此同时,MTB感染在8h和24h分别激活了巨噬细胞的外源性死亡受体通路和内源性凋亡通路,提示在巨噬细胞吞噬杀灭MTB的同时,MTB也可以诱导细胞死亡,二者始终处于对抗状态。 值得一提的是,通过MTB相关巨噬细胞外泌体转录组的分析,发现外泌体中的差异基因变化趋势、信号通路与关键上游调控因子的活化水平,多数与巨噬细胞内的变化趋势相反。而且,在外泌体中检测到大量的MTB转录本,其种类与丰度均较巨噬细胞内显著增多。这些结果提示我们,外泌体很可能一方面作为巨噬细胞免疫功能相关基因表达产物的“储藏库”,另一方面作为病原菌裂解产物的“垃圾场”或“运输车”,在宿主抗MTB免疫反应中发挥重要作用。 本研究描绘了MTB感染后,巨噬细胞由“静止巨噬细胞”—“炎症性巨噬细胞”—“预备役巨噬细胞”的逐步转变进程及伴随的MTB诱导巨噬细胞死亡进程,并且揭示了其中的信号网络动态变化规律,对宿主抗MTB免疫反应机制研究有重要的借鉴意义。