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目的:本研究以人非小细胞肺癌细胞系A549和NCI-H460为研究对象,选择目前非小细胞肺癌标准一线治疗方案中的化疗药物紫杉醇(Paclitaxel,PAC)和吉西他滨(Gemcitabine,GEM),标准二线治疗药物培美曲塞(Pemetrexed,MTA)以及分子靶向药物中针对EGFR和HER-2的单克隆抗体Cetuximab(C-225)和Trastuzumab(TRA),通过体外实验,分别观察MTA与化疗的不同联合作用方式及靶向药物的联合对人非小细胞肺癌细胞系A549和NCI-H460的抑制作用。以期为临床治疗中方案的选择、用药顺序提供一定的参考。方法:(1).采用绘制细胞生长曲线,计算半数抑制浓度(IC50),MTT比色实验以及集落抑制实验等方法观察MTA、PAC、GEM、C-225和TRA单药及不同浓度和不同联合作用方式下对细胞的增殖抑制作用。并采用中效原则计算各联合用药组的联合指数(CI值),分析药物联合作用的效应是协同、相加或拮抗。(2).采用细胞化学、细胞周期和Annexin V-FITC/PI双标记染色等方法分析细胞形态学、周期分布和细胞凋亡情况。结果:实验一,MTA联合PAC对A549和NCI-H460细胞系增殖抑制的联合效应与用药顺序有关,中效原则分析证实序贯用药表现为协同效应(CI值<1),同步用药表现为拮抗效应(CI值>1);且序贯用药组在导致细胞周期阻滞和诱导凋亡方面均优于同步组。比较序贯组间的作用发现,与对照组相比,PAC→MTA组诱导A549细胞凋亡增加的比率略高于MTA→PAC组(28.84%vs.29.45%),但两者差异很小;MTA→PAC组诱导NCI-H460细胞凋亡增加的比率高于PAC→MTA组(13.29%vs.7.22%)。实验二,MTA联合GEM对两细胞系增殖抑制的联合效应也与用药顺序有关,中效原则分析证实序贯用药表现为协同效应(CI值<1),同步用药表现为拮抗效应(CI值>1);并且序贯用药组在导致细胞周期阻滞和诱导凋亡方面均优于同步组。比较序贯组间的作用发现,与对照组相比,GEM→MTA组诱导A549细胞凋亡增加的比率高于MTA→GEM组(26.46%vs.22.00%);GEM→MTA组诱导NCI-H460细胞凋亡增加的比率也高于MTA→GEM(13.40%vs.10.27%)。实验三,C-225联合TRA对A549和NCI-H460细胞系增殖的影响。发现TRA可以增强C-225对细胞增殖的抑制作用,联合TRA对A549细胞的抑制率较单药C-225增加6.6%,对NCI-H460细胞的抑制率增加2.2%;周期分布和凋亡检测显示,单药C-225较对照组可使A549细胞G0/G1期阻滞增加6.09%,细胞凋亡比率增加1.03%,却对NCI-H460细胞周期和凋亡比率影响不大;联合TRA后可使A549细胞凋亡比率增加4.89%,NCI-H460细胞凋亡率增加8.93%。结论:(1).MTA、PAC和GEM三药单独作用时均能抑制人NSCLC细胞系A549和NCI-H460的增殖,并且存在剂量依赖性,药物剂量越高,抑制作用越明显;C-225在一定剂量范围内,对两细胞系增殖抑制作用表现为剂量依赖性。(2).NSCLC二线标准治疗药物MTA联合一线化疗药物(PAC和GEM)对肿瘤细胞的生长抑制与联合方式相关。MTA与PAC联合时序贯给药方式表现为协同效应,且抑制细胞增殖、阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡的作用优于同步给药的方式,序贯应用比同步应用可增强疗效。MTA联合GEM时也存在相似的现象。序贯组间的比较发现:对于A549细胞,PAC→MTA与MTA→PAC组,这两种序贯给药的联合优势等同;GEM→MTA序贯优于MTA→GEM。对于NCI-H460细胞,MTA→PAC序贯优于PAC→MTA;GEM→MTA序贯优于MTA→GEM。(3).TRA可一定程度增强C-225对A549和NCI-H460细胞系的增殖抑制作用,并可增加诱导凋亡细胞的比率。