论文部分内容阅读
目的:研究PRMT2对乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞tamoxifen(TAM)耐药的影响,并对其机制进行初步探讨,为耐药性乳腺癌的治疗提供新思路。方法:1.PRMT2 sh RNA的构建及鉴定;2.PRMT2 sh RNA慢病毒载体及MCF-7-PRMT2-KD稳定细胞株的建立与鉴定;3.通过流式细胞术,从细胞水平检测高表达PRMT2对TAM引起的乳腺癌细胞死亡的影响;4.利用蛋白质免疫印迹法,从蛋白水平分析TAM对乳腺癌细胞PRMT2、ER-ɑ36及P-ERK1/2表达的影响。结果:1.成功构建PRMT2sh RNA及鉴定,并且成功构建MCF-7-PRMT2-KD稳定细胞株;2.流式细胞术结果显示:MCF-7-PRMT2细胞系在无四环素诱导时(PRMT2未高表达),经TAM(7.5μmol/L)处理4小时后,细胞的死亡率明显比未加TAM组增加,且有统计学意义(P<0.05);MCF-7-PRMT2细胞系在无四环素诱导与四环素诱导后相比,四环素诱导的(PRMT2高表达)细胞死亡率有所增加,但没有统计学意义;而MCF-7-PRMT2细胞系在四环素诱导(PRMT2高表达)后,再经TAM(7.5μmol/L)药物处理4小时,细胞的死亡率明显比未加TAM组增加,有统计学意义(P<0.05);MCF-7-PRMT2细胞系在四环素诱导(PRMT2高表达)后再加TAM处理比起无四环素诱导(PRMT2未高表达)再加TAM处理的细胞死亡率要高,有统计学意义(P<0.05);3.WB结果显示:在对TAM相对敏感的MCF-7细胞系中,同浓度TAM(2μmol/L)处理细胞0,1/2h,1h,2h,4h后,PRMT2的表达水平略上调,P-ERK1/2表达水平略下调,而此细胞系中ER-ɑ36的表达水平无变化;然而,在对TAM相对耐药的MDA-MB-231细胞系中,同浓度TAM(2μmol/L)处理细胞0,1/2h,1h,2h,4h后,PRMT2的表达水平明显下调,ER-ɑ36的表达水平明显上调,伴随着P-ERK1/2表达水平逐渐上调,变化也都具有时间依赖性特点;4.WB结果显示:在MCF-7细胞中,PRMT2低表达时P-ERK1/2表达上调,PRMT2过表达P-ERK1/2表达下调。结论:1.成功构建稳定敲低PRMT2的MCF-7细胞株。2.PRMT2能够提高MCF-7细胞对TAM的敏感性,其机制可能与抑制P-ERK1/2水平有关。3.在MDA-MB-231细胞中,TAM可以抑制PRMT2的表达水平,上调ER-ɑ36、P-ERK1/2的表达水平,PRMT2可能参与到MDA-MB-231细胞的耐药形成。