甘蔗制糖生产中葡聚糖测定方法的研究

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在甘蔗制糖生产中出现的葡聚糖是由肠膜明串珠菌属感染所产生的-种高分子微生物多糖,其主要为α-葡聚糖。葡聚糖的存在对原料甘蔗的新鲜度、制糖工艺过程的稳定性以及最终成品的产率和品质,都有极大的负面影响。制糖产业每年因葡聚糖的影响而损失的白砂糖都有几万吨,给生产企业带来严重的经济损失。因此,对葡聚糖的含量进行监测是制糖行业一直以来非常关注的问题。多年来,许多科研工作者对葡聚糖的检测进行了大量探索研究,尝试建立一种快速、准确、稳定且适用范围广的葡聚糖测定方法。本论文用免疫比浊法、Roberts-铜法以及酒精HAZE法三种葡聚糖测定方法定量测定制糖生产中的原料、在制品、产品及副产品,通过对这三种方法的对比研究,阐明各种检测方法的优缺点以及使用范围,特别强调了免疫比浊法的特异性强、预处理及检测过程简便快捷、结果准确可靠的优点。同时为克服免疫比浊法中的单克隆抗体使用成本偏高的缺点,本文还进行了胶乳增强的初步研究。从而为实现甘蔗制糖生产中对葡聚糖实时监测,提高生产管理效率提供理论依据。本文的主要研究内容和结果如下:(1)本论文用免疫比浊法、Roberts-铜法及酒精HAZE法三种方法定量测定制糖生产中的原料、在制品、产品及副产品,对比研究三种方法的准确性、重现性以及适用范围,实验结果表明,免疫比浊法在准确性、稳定性及适用范围上都优于Roberts-铜法和酒精HAZE法,综合其简便快捷且特异性强的特点,是目前制糖生产中最佳的葡聚糖测定方法。(2)通过免疫比浊法、Roberts-铜法及酒精HAZE法三种方法分别对标准Dextran T-2000溶液、原糖、混合汁、清汁及糖浆进行加标回收和重现性实验后,三种测定方法实验结果对比显示,在对几种物料进行测定时,免疫比浊法平均加标回收率(99.7%~100.1%)>Roberts-铜法平均加标回收率(96.2%~98.7%)>酒精HAZE法加标回收率(92.6%~96.8%),其中三种方法重复性RSD值均<5%,且免疫比浊法RSD值(0.82%~1.12%)<Roberts-铜法RSD值(1.23%~1.93%)<酒精HAZE法法RSD值(1.31%~3.11%)。并且,随着检测样品中非糖物质的增多,检测准确性及稳定性都随之降低,而酒精HAZE法变化最为显著,Roberts-铜法次之,免疫比浊法所受影响较小。(3)用免疫比浊法、Roberts-铜法及酒精HAZE法三种方法对初压汁、混合汁、清汁、糖浆、原糖及白砂糖六种样品进行葡聚糖含量的测定。测定结果分析表明,酒精HAZE法测定的所有结果均高于其他两种测定方法,且样品颜色越深、成分越复杂,测定结果差异越明显。对比免疫比浊法和Roberts-铜法测定结果,Roberts-铜法测定结果稍高于免疫比浊法测定结果。两者受物料颜色和成分的影响程度小于酒精HAZE法。(4)研究了蔗汁中常见的几种非糖物质(没食子酸、钙离子、美拉德色素、果胶)以及样品pH值对免疫比浊法测定葡聚糖含量准确性的影响,实验结果显示,没食子酸、钙离子、美拉德色素、果胶的存在及样品pH值的变化对免疫比浊法测定葡聚糖含量准确性影响不显著。(5)对胶乳增强免疫比浊法进行了初步探索,实验发现,胶乳微球在活化剂EDC/NHS的作用下,活化20min后在pH值为7.00的PBS缓冲液中与浓度为3mg/mL的葡聚糖抗体蛋白交联2h,免疫胶乳可得到较高的交联效率(54.91%)。对所制备的免疫胶乳进行SEM、TEM及FTIR表征,结果显示,葡聚糖单抗共价结合在胶乳微球表面。
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