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目的采用传代的人脑多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)新鲜手术标本来建立呈侵袭性生长及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)高表达的人脑GBM裸小鼠脑原位移植模型,然后在此已建立的能保持亲本肿瘤生物学特性的人脑恶性胶质瘤原位移植模型基础上,把EGFR抑制剂与常规化疗药物或与血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR2)抑制剂联合应用来治疗人脑GBM移植瘤,以探讨不同作用机理的化学治疗药物联合应用后对GBM的疗效。方法将传代的新鲜人脑GBM手术标本行裸小鼠右尾状核接种后第3d用于分组实验。(1)40只鼠随机分为4组,10只/组,各组鼠分别应用靶向EGFR的蛋白酪氨酸激酶抑制剂AG1478(25mg/kg.次)、CDDP(3mg/kg.次)、AG1478+CDDP(25mg/kg.次+3mg/kg.次)及磷酸盐缓冲液(PBS,0.1ml/只.次)。PBS和药物均腹腔注射,每2d一次,共4次,用药后分别观察各组荷瘤鼠生存期。再取40只鼠,重复上述实验,肿瘤移植后14d处死所有组鼠取脑,HE染色后观察各组移植瘤形态及体积变化;EnVision和Western Blot法检测移植瘤中EGFR、磷酸化EGFR(P-EGFR)、增殖活性(Ki-67 labelling index,即Ki-67 LI)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor ,VEGF)、白细胞介素-8(IL-8)和微血管密度(microvessel density,MVD)变化;TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡(apoptotic index即AI)变化。(2)40只荷瘤鼠随机分为4组,10只/组,分别应用靶向EGFR的单克隆抗体C225(50mg/kg.次)、靶向VEGFR-2的单克隆抗体DC101(40mg/kg.次)、C225+DC101 (50mg/kg.次+40 mg/kg.次)及PBS(0.1ml/只.次)。PBS组和药物均腹腔注射,每2d一次,共4次。肿瘤移植后14d,处死所有组鼠取脑,HE染色观察各组移植瘤形态及体积变化;EnVision法检测移植瘤中基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase,MMP1)、MVD及增值活性变化;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡变化。结果(1)与对照组生存期为19.4±0.6d比较,单用CDDP或AG1478后荷瘤鼠生存期分别为20.7±0.4d和20.8±0.6d(P>0.05),而CDDP+AG1478组荷瘤鼠生存期为33.6±0.9d(P<0.05);CDDP+AG1478能明显减小移植瘤体积、降低增殖活性及促进肿瘤细胞凋亡,而单独用药对此不明显。AG1478及CDDP+AG1478抑制了EGFR磷酸化,使P-EGFR表达下降,并降低VEGF、IL-8表达量及减少MVD。(2)与对照组比较,DC101组移植瘤体积下降了59.7%(P<0.05),DC101+C225组移植瘤体积下降了62.9%(P<0.05),而C225组对移植瘤体积几乎无影响(P>0.05);DC101组移植瘤侵袭性加强,移植瘤中MMP1表达为(++);C225组移植瘤侵袭性下降,移植瘤中MMP1表达阳性(+);C225+DC101组移植瘤侵袭性也下降,移植瘤中MMP1表达阳性(+);DC101组移植瘤中MVD减少了64(%P<0.05),C225+DC101组MVD减少了68(%P<0.05),C225组的MVD无明显变化(P>0.05);DC101组肿瘤细胞Ki-67 LI下降了53.2%(P<0.05),DC101+C225联合用药后Ki-67 LI下降了56.4%(P<0.05),而C225组下降不明显(P>0.05);DC101诱导细胞AI增加了66.7%(P<0.05),DC101+C225联合用药后AI增加了75%(P<0.05),而C225用药后增加不明显(P>0.05)。结论(1)AG1478与CDDP联合应用比单独用药有显著的抗肿瘤生长疗效,并在一定程度上抑制了肿瘤的血管生成,这为EGFR抑制剂和常规化疗药物联合治疗恶性胶质瘤提供了实验依据。(2)DC101与C225联合用药显著抑制GBM移植瘤生长,并降低了移植瘤侵袭和转移特性,两药合用疗效优于单用的疗效,这为抗肿瘤血管生成药物与抗肿瘤侵袭药物合用治疗恶性胶质瘤提供了实验依据。