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第一部分:HPV型别与CIN的关系探讨目的:研究不同程度宫颈病变感染人乳头瘤病毒(HPV)的亚型种类及其与宫颈上皮内瘤变(CIN)的关系,并探讨多种型别HPV混合感染与宫颈病变发展的关系。方法:选取2006年9月至2007年12月,经新柏氏薄层膜式液基细胞学检测(TCT)异常、高危型HPV-DNA检测(第二代杂交捕获试验)阳性、电子阴道镜(EC)检查以及宫颈活检或宫颈切除术后病理确诊的HPV感染及CIN病例共60例,包括HPV感染、CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ病例各20例,另选正常对照20例。采用核酸分子快速导流杂交基因分型技术(简称HybriMax)进行HPV分型检测的研究。结果:HPV-DNA阴性率为21.25%,HPV-DNA阳性率为78.75%,其中HPV16、58、33、31、18-DNA阳性率分别为43.75%、13.75%、7.50%、6.25%、3.75%。多种型别HPV混合感染率为12.50%,其中CINⅡ-Ⅲ组、HPV感染组分别为11.67%、3.33%,与宫颈炎组5%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。宫颈癌前病变组中,HPV16-DNA阳性率为58.33%,与宫颈炎组(0)比较,差异有统计学意义(P<0.05),其HPV58、33、31、18-DNA阳性率(13.33%、10%、8.33%、5%)与宫颈炎组(5%、10%、0、0)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HPV16-DNA阳性与宫颈癌前病变之间呈中度相关(r =0.479,P<0.05)。结论:①HPV16感染与宫颈癌前病变的发生密切相关,HPV多种型别混合感染与宫颈病变级别无关。②正常人群有一定HPV携带率。第二部分宫颈局部HPV病毒颗粒IgG1、IgG2亚类与CIN的关系目的:探讨HPV病毒颗粒(VLPs)IgG1、IgG2亚类抗体在各级别宫颈病变患者宫颈组织中的表达及其与不同级别宫颈病变的关系。方法:选取2006年9月至2007年12月,经TCT检测结果异常、高危型HPV-DNA检测(第二代杂交捕获试验)阳性、EC检查以及宫颈活检或宫颈切除术后病理确诊的HPV感染及CIN病例共60例,包括HPV感染、CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ病例各20例,另选正常对照20例。采用RT-PCR半定量技术和免疫组织化学染色法,检测上述不同宫颈组织中HPV VLPs-IgG1、IgG2表达。结果:①RT-PCR表明,研究组HPV VLPs-IgG1、IgG2mRNA表达率分别为90%、87%。对照组分别为85%、90%,差异无统计学意义(P>0.05)。其中HPV感染组HPV VLPs-IgG1、IgG2mRNA表达率分别为90%、95%,CINⅠ组均为80%。HPV感染组HPV VLPs-IgG1、IgG2mRNA表达强度分别为0.611±0.033、0.458±0.076,CINⅠ组分别为1.306±0.022、1.311±0.065。前两者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。后两者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CINⅡ-Ⅲ组宫颈组织中HPV VLPs-IgG1mRNA及IgG2mRNA表达率分别为95%、85%,与HPV感染组、CINⅠ组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。但其IgG1 mRNA表达强度(1.956±0.041)却明显高于HPV感染组、CINⅠ组,(P<0.05)。CINⅡ-Ⅲ组HPV VLPs-IgG2mRNA表达强度(1.512±0.037)与CINⅠ组、对照组(1.540±0.055)相当,但HPV感染组IgG2mRNA表达强度明显低于其它三组(P<0.05)。对照组HPV VLPs-IgG1mRNA表达率为85%,表达强度为0.403±0.005,与HPV感染组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组HPV VLPs-IgG2mRNA的表达强度明显高于其IgG1mRNA表达强度,(P<0.05)。对照组、HPV感染组、CINⅠ组以IgG2为主导状态的百分率较CINⅡ-Ⅲ组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV感染组、CINⅠ组分别与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②免疫组化结果表明,研究组宫颈组织HPV VLPs-IgG1、IgG2抗体表达率分别为62%、65%,与对照组(5%、100%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。随着CIN级别增高,HPV VLPs-IgG1表达有逐渐增强趋势。HPV VLPs-IgG1表达在CINⅡ-Ⅲ组均为阳性,在正常对照组、HPV感染组、CINⅠ组分别为5%、20%、65%。HPV感染组、CINⅠ组、CINⅡ-Ⅲ组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV感染组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在对照组中,HPV VLPs-IgG2表达均为阳性,明显高于其IgG1表达率。HPV感染组、CINⅠ和CINⅡ-Ⅲ组HPV VLPs-IgG2表达率分别为30%、75%、90%。HPV感染组IgG2表达率显著低于对照组、CINⅠ组、CINⅡ-Ⅲ组,(P<0.05)。CINⅠ组、CINⅡ-Ⅲ组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组中,HPV VLPs-IgG1主要为阴性表达,IgG2阳性细胞弥漫分布于宫颈基质层。HPV感染组中,HPV VLPs-IgG1、IgG2阳性细胞多散在分布于宫颈基质层,宫颈上皮层几乎无表达。CINⅠ组中,HPV VLPs-IgG1、IgG2阳性细胞弥漫分布于宫颈基质,宫颈上皮层仅少量表达。CINⅡ-Ⅲ组中,HPV VLPs-IgG1、IgG2阳性细胞均弥漫分布于宫颈基质以及宫颈鳞状上皮下2/3以上或全层。结论:①H PV VLPs-IgG1、IgG2mRNA,IgG1、IgG2阳性表达率在宫颈高级别病变中增高,可能与HPV持续感染和CIN进展有关。②机体感染HPV后,低级别宫颈病变组、对照组以IgG2主导的宫颈局部免疫状态,可能与HPV清除和宫颈病变逆转有关。③H PV VLPs-IgG1阳性表达位置分布与宫颈病变级别相关。第三部分血清HPV16病毒颗粒IgG1、IgG2亚类与CIN的关系目的:探讨HPV16VLPs-IgG1、IgG2亚类抗体在各级别宫颈病变患者血清中的表达及其与不同级别宫颈病变的关系。方法:选择2006年9月至2007年12月间,TCT检测结果异常、高危型HPV-DNA检测(第二代杂交捕获试验)阳性、EC检查以及宫颈活检或宫颈切除术后病理确诊的HPV感染及CIN病例共105例,包括HPV感染32例、CINⅠ30例、CINⅡ-Ⅲ43例,另选正常对照24例。ELISA法检测患者血清HPV16VLPs-IgG1、IgG2亚类抗体的表达水平。结果:①宫颈癌前病变患者血清HPV16VLPs-IgG、IgG1、IgG2阳性率分别为35.24%、29.52%、29.52%,明显高于对照组(8.33%),差异有统计学意义(P<0.05)。HPV感染组HPV16VLPs-IgG、IgG1、IgG2抗体阳性率(25.00%、18.75%、25.00%)与CINⅠ组(26.67%、23.33%、20.00%)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。但与对照组(8.33%)、CINⅡ-Ⅲ组(48.84%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV16VLPs-IgG、IgG1抗体OD值随宫颈病变级别增高而增加,HPV感染组HPV16 VLPs-IgG、IgG1抗体OD值为分别0.485±0.037、0.311±0.020,CINⅠ组分别为1.531±0.013、1.104±0.029,CINⅡ-Ⅲ组增高达2.421±0.002、1.941±0.038,各组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV感染组与对照组(0.328±0.017、0.308±0.019)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组HPV16VLPs-IgG2抗体OD值为1.611±0.021,明显高于其IgG1表达,(P<0.05)。CINⅠ组、CINⅡ-Ⅲ组HPV16VLPs-IgG2抗体OD值分别为1.686±0.013、1.831±0.064,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。但这三组IgG2抗体OD值均明显高于HPV感染组(0.551±0.042),(P<0.05)。②对照组、HPV感染组、CINⅠ组以IgG2抗体为主导(IgG2/IgG1>1)分别为100%、87.50%、75%,CINⅡ-Ⅲ组仅为9.52%。前三者分别与CINⅡ-Ⅲ组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV感染组、CINⅠ组分别于对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。③HPV16-DNA阳性患者HPV16VLPs-IgG、IgG1及IgG2阳性率均为74.29%,非HPV16-DNA阳性患者HPV16VLPs-IgG阳性率为15.71%,IgG1和IgG2阳性率均为7.14%,明显低于HPV16-DNA阳性组,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV16-DNA阳性组HPV16VLPs-IgG、IgG1及IgG2抗体OD值分别为(1.564±0.062、1.365±0.037),明显高于非HPV16-DNA阳性组(0.453±0.016、0.351±0.022),差异有统计学意义(P<0.05)。HPV16-DNA检测与血清HPV16VLPs-IgG抗体检测之间呈中度相关(r =0.531,P<0.05)。结论:①血清HPV16VLPs-IgG及其亚类抗体检测与HPV-DNA检测结论基本一致。血清学检测阳性既可代表现存HPV感染,也可表示既往HPV感染。②宫颈癌前病变尤其是CINⅡ-Ⅲ患者血清HPV16VLPs-IgG及其亚类表达增高,可能与病毒持续时间、病变严重程度有关。③机体感染HPV后,低级别宫颈病变组、对照组血清HPV16VLPs-IgG2抗体表达增高(IgG2/IgG1>1),可能与HPV清除和宫颈病变逆转有关。