基于磁性微粒纯化法医样本DNA方法的建立

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众所周知,法医样本的DNA纯化是法医DNA分析的关键技术之一。在案件侦破过程中,案发现场常会残留各种微量物证,如微量血痕、精斑、各种衣物纤维上附着的脱落细胞等,这些微量物证的DNA检验对案件的侦破均具有重要的支持作用。但由于此类疑难物证中的DNA含量极少、DNA分子受到外界环境影响易发生损伤或降解、样本本身或在收集过程中常伴有抑制剂残留,这些均给后续的DNA分析造成较大难度。由此可见,高质量DNA纯化技术的应用是成功进行法医疑难物证DNA检测的前提。目前,犯罪实验室中主流的DNA纯化技术为Chelex-100、硅膜离心柱法,其操作步骤繁琐,纯化效率、产物纯度及完整性相对欠缺,且大多依赖于国外昂贵的试剂盒。因此,本课题以自主研发的“二氧化硅磁性微粒”作为固相载体,以血斑、毛囊为主要实验样本,旨在建立一套高效、廉价且快捷的法医样本DNA纯化方案。此方法利用固相纯化原理,在特定条件下将DNA非特异性地结合于磁性微粒表面,形成“DNA-磁性微粒复合物”,在外加磁场的作用下选择性分离,从而达到纯化的目的。研究结果表明:1)该方法能够稳定地从血斑样本中纯化得到较高质量的DNA。5mm直径的血斑,DNA纯化产量约65ng,且完整性良好,可直接用于下游PCR反应;批内、批间变异系数分别为7.93%-8.78%、10.1%,与市售同类试剂盒具有可比性;亦可从微量血液、口腔拭子、烟蒂、口香糖等常见法医检材中分离纯化DNA,适应性广泛。2)对上述裂解体系中的盐成份、Ca2+及SDS终浓度做进一步优化,可高效地从毛囊中分离纯化DNA。三根毛发的毛囊,其DNA纯化产量约30-35ng;A260/A280比值在1.7-1.9之间,纯度较高;STRs复合扩增表明DNA分子完整性良好;亦可纯化得到高质量、完整的mtDNA。
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