在重力自平衡的自由流设备中用亲和自由流电泳模式提高组氨酸的分离效率

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自由流电泳发展到现在几十年间一直存在着两个重要的问题:分离模式的缺乏以及分离效率较低。在本实验课题中,我们首次提出了一种新型的自由流电泳模式——“亲和自由流电泳”。这个模式的提出不但丰富了自由流的传统模式而且还间接的提高了自由流电泳的分离效率。在亲和自由流电泳这个模式中,有较高电荷密度的镍离子作为模型配体,组氨酸作为目标物。通过实验条件的控制,镍离子可以与组氨酸结合,结合形成的组氨酸-镍离子复合物与低电荷密度的游离组氨酸分子相比,有很高的电荷密度。与此同时,配体与其它组氨酸却只有很微弱的相互作用。因此,跟其它组氨酸相比,以组氨酸-镍离子复合物形式存在的组氨酸的迁移率大大的提高了,从而实现了对组氨酸的选择性的分离和纯化。基于这个模式,我们设计了亲和自由流电泳的操作程序并实施了相关实验。实验共分为两部分,第一部分首先是区带毛细管电泳的软件模拟的设计,用于预测20种氨基酸在不同条件下的分离状况,以确定有价值的目标待分离物,这一简单、实用、快速的现代方法的引进是本文的一大亮点。其次是在毛细管中对分离条件形成选择和优化,推导出亲和自由流电泳的分离体系。第二部分是亲和自由流电泳模式可行性的验证。在这部分中,先后进行了两种不同的自由流电泳模式,毛细管检测,氨基酸分析等。最后,通过对普通的自由流区带电泳和亲和自由流电泳的分离效率的比较,分析得出亲和自由流电泳的优势和应用潜力。这些实验表明:(1)该技术可以大大的提高目标物组氨酸和其它氨基酸之间的分离度;(2)该技术可以选择性的将组氨酸从其复合物基质中分离出来;(3)该亲和自由流电泳技术可以用于将组氨酸从其复合物基质中连续分离出来,并且分离出来的组氨酸的纯度达到100%。因此,这里提到的亲和自由流电泳技术在某些重要的目标生物样本(例如蛋白质,多肽,核酸)的分离纯化中有广泛的应用潜力。
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