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第一部分原藜芦碱A的毒性及其与人参总皂苷的配伍研究目的:对原藜芦碱A进行毒性及配伍研究,明确原藜芦碱A的毒性靶器官,探索与人参皂苷的配伍关系。方法:(1)急性毒性:32只wistar大鼠,设20.0 mg/kg、10.0 mg/kg、5.0 mg/kg、2.5 mg/kg共4个剂量组,观察给药后动物的毒性反应症状及24 h内死亡情况,根据死亡情况用Bliss法计算LD50。Beagle犬,8只,每组2只,分别给原藜芦碱A ig 0.5 mg/kg,ig 0.25 mg/kg,iv 0.2 mg/kg,iv 0.002 mg/kg,给药后观察毒性反应症状;(2)重复给药毒性试验:Wistar大鼠36只,分成空白对照组,1 mg/kg组,0.5 mg/kg组共3组,入代谢笼单笼饲养。每天ig给药,连续14天。每周称体重,隔天测尿量。14天后处死,采血测生化、血象指标。解剖取心、肝、脾、肺、肾、脑、胃等主要脏器进行病理组织学观察;(3)心血管系统、呼吸系统毒性观察:40只wistar大鼠分为空白对照组(溶媒)、原藜芦碱A 4 mg/kg组、原藜芦碱A 2 mg/kg组、原藜芦碱A 1mg/kg组共4组,每组10只,观察记录动物给药后3h内的心电、血压、呼吸变化;(4)降压机制研究:取健康Wistar大鼠,分别侧脑室给药2.5μg/kg,尾静脉给药0.05 mg/kg,观察其降压作用。用酚妥拉明、阿托品行α受体、M受体阻断,再给原藜芦碱A,观察其降压情况;(5)人参总皂苷与原藜芦碱A配伍毒性:50只wistar大鼠分为5组,每组10只,组别为空白对照组(溶媒)、人参皂苷组(TG 10 mg/kg)、原藜芦碱A组(PA 2 mg/kg)、TG与PA 5:1配伍组(TG 10 mg/kg,PA 2 mg/kg)、TG与PA 5:2配伍组(TG 5 mg/kg,PA 2 mg/kg),麻醉后行颈动脉插管术,记录给药后3h心电、血压、呼吸情况。结果:大鼠ig原藜芦碱A的LD50为5.1 mg/kg;Beagle犬ig 0.5 mg/kg原藜芦碱A即可出现持续性呕吐、排稀便、全身瘫痪等严重毒性反应症状,Beagle犬iv 0.02 mg/kg 30 s即出现站立不稳.约1 min出现呕吐,肌强直,约5 min死亡。iv 0.002 mg/kg后约30 s动物出现站立不稳,呼吸深快,频繁舔舌,10 min后能正常站立;大鼠重复给药原藜芦碱A后体重减轻、尿量增多,血液学指标HCT下降、中性粒细胞增多、淋巴细胞减少,血液生化指标AST、ALP、CPK、LDH、BUN增高,肝、肾组织出现病理性改变;原藜芦碱A单次给药能显著降低大鼠血压、减慢心率、减缓呼吸、严重时导致心律失常;微量原藜芦碱A侧脑室注射能引起大鼠血压下降,且最低点出现在3 min左右,延后于静脉给药(给药后1-2 min出现最低点);TG与PA 5:2配比后对血压、心率、呼吸频率的影响小于单用原藜芦碱A组(P<0.05),而TG与PA 5:1配比后对血压、心率、呼吸频率的影响大于单用原藜芦碱A组(P<0.05)。结论:原藜芦碱A小剂量能使动物出现较大的毒性反应症状。Beagle犬ig原藜芦碱A后严重中毒剂量为0.5 mg/kg,iv致死剂量为0.02 mg/kg,中毒剂量为0.002 mg/kg;原藜芦碱A重复给药大鼠,对动物有一定的利尿作用,对心、肝、肾等组织有毒性作用;原藜芦碱A能降低血压、减缓心率、减慢呼吸、致心律失常,降压机制为中枢系统和外周共同参与;藜芦人参配伍毒性大小与配伍比例有关。第二部分奈西立肽猴比较长期毒性实验研究目的:观察化学合成的奈西立肽连续静滴(vd)食蟹猴14天的长期毒性,并与已上市同类生物技术药冻干重组人脑利钠肽(新活素)的毒性进行比较。方法:30只健康食蟹猴分别按体质量随机分为5组:空白对照组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。每组6条,雌雄各半。低、中、高剂量组给药量分别为432、1440、4320μg/kg,给药体积18 ml/kg,相应给药浓度分别为24、80、240μg /ml,阳性对照组为市售新活素,给药剂量和中剂量组相当,滴注速度约为18 ml/kg/hr。连续给药14天。末次给药后24 h处死一半动物做病理解剖,另一半停药后继续观察14天后,进行病理解剖。观察症状和检测指标包括体重、食量等一般症状及指标,血压,心电图,红细胞等血液学指标、乳酸脱氢酶(LDH)等血液生化指标、补体C3等免疫学指标、尿量等尿液指标、骨髓检查、病理组织学检查。结果:高剂量组、中剂量组和阳性对照组的LDH值d7和d14时高于d0的数值,同时高于空白对照组和低剂量组,恢复期差异消失;高剂量组的磷酸肌酸激酶(CPK)值d7时高于空白对照组,阳性对照组d7时高于d0、空白对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,恢复期差异消失;个别高剂量动物肾素和醛固酮指标有一定程度的降低,但无统计学差异,恢复期时指标恢复到给药前水平。给药后d1、d7、d14,与空白对照组或与给药前相比,给药组平均动脉压在给药后有不同程度的下降,一般在120 ~ 150 min内恢复正常。其余一般症状、心电图、血液学指标、免疫学指标、尿液指标、骨髓检查、病理检查、病理组织学检查未见异常改变。结论:奈西立肽vd食蟹猴14天,奈西立肽组高剂量组、中剂量组和阳性对照组动物在给药后出现血压下降、乳酸脱氢酶和肌酸磷酸激酶升高等反应,这些作用均为可逆。奈西立肽vd对食蟹猴的安全剂量为432μg/kg,毒性剂量为1440μg/kg,主要毒性靶器官为心血管系统。阳性对照药物(新活素)与受试药具有较为相近的药理毒理作用。说明合成产品与重组产品并无明显毒理学差异。