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目的:通过回顾既往临床病例,评估Masquelet技术治疗节段性骨缺损的临床疗效,探讨其优缺点。建立一种成熟的大鼠股骨Masquelet诱导膜实验模型,为后期研究中药对诱导膜形成影响的实验奠定基础。检测诱导膜中三元调控理论各关键因子及VEGF、HMGB1的表达,探讨骨碎补总黄酮对诱导膜形成的影响。方法:Masquelet技术病例回顾:回顾分析广州中医药大学第一附属医院创伤骨科2014年1月-2017年9月采用Masquelet技术治疗的病例,共9例。通过观察骨缺损长度、骨愈合情况、移植物、手术次数等指标来评估Masquelet技术治疗节段性骨缺损的临床疗效。Masquelet诱导膜实验模型的建立:选取SPF级雄性SD大鼠24只,鼠龄8–10周,体重260g-280 g,随机分成观察组和对照组。在股骨中段制作一4mm骨缺损,采用钢板固定后,观察组置入PMMA骨水泥块,对照组不放置骨水泥块,术后常规护理。4周后取材观察其大体外观,影像学及诱导膜组织学特点。基于三元调控理论探讨骨碎补总黄酮对诱导膜形成影响的实验研究:选取SPF级雄性SD大鼠60只,按体重分层后随机分为空白组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组5个组,每组12只。采用第二章模型建立方法成功造模后,于术后第二天开始用不同浓度的骨碎补总黄酮给各中药组灌胃,模型组及空白组给予等量纯水灌胃,直至术后第28天。术后第28天拍摄X线后获取各组诱导膜组织进行相关指标检测。通过X线观察钢板、螺钉、PMMA及截骨端位置情况;通过HE染色观察各组诱导膜组织大体形态学特点;通过免疫组化及western blot检测各组诱导膜组织相关蛋白的表达;通过q-PCR分析各组诱导膜组织中三元调控通路关键因子及VEGF、HMGB1的mRNA表达情况。结果:Masquelet技术病例回顾:经随访9例患者均获得骨性愈合,平均愈合时间为6.3±1.2个月;平均经历2.9±1.4次手术。1例出现取骨区疼痛,1例出现踝关节僵硬,1例出现外支架松动及骨髓腔内感染复发,1例出现膝关节僵硬及近端骨髓腔内感染复发。Masquelet诱导膜实验模型的建立:两组大鼠术后均能正常进食排便,术后第2天均可正常行走,切口均愈合良好、未见感染。对照组出现钢板松动2例;观察组出现术肢持续肿胀、膝关节活动受限1例,但截骨断端对位、对线均良好,钢板及螺钉均在位无松脱;PMMA无移位及翻转;截骨端维持恒定的4mm间隙。观察组诱导膜组织中含有大量细胞,形成丰富的血管网及平行于PMMA骨水泥块的纤维组织;对照组诱导膜中所含血管明显减少。基于三元调控理论探讨骨碎补总黄酮对诱导膜形成影响的实验研究:造模后4周各组X线证实钢板、螺钉及PMMA的位置良好,固定牢靠,截骨端对位对线良好。总体而言,q-PCR结果显示与空白组和模型组比较,中药组中三元调控通路各关键因子（PDGF-BB、CD31、Endomucin）及VEGF、HMGB1的基因表达有所提高（P<0.05）,但部分因子受中药浓度影响较大。western blot检测表明与空白组和模型组比较,中药组中三元调控通路各关键因子（PDGF-BB、CD31、Endomucin）及VEGF、HMGB1的蛋白表达明显提高（P<0.05）,仅个别因子受中药浓度的影响。免疫组化结果显示诱导膜组织中CD31蛋白为强阳性表达,而Endomucin蛋白的表达则为弱阳性。结论:Masquelet技术病例回顾:采用Masquelet技术治疗节段性骨缺损临床效果满意,但移植骨血管化、皮质化缓慢导致治疗周期延长,同时可能出现感染复发等并发症,尤其是初次采用髓内钉固定的患者。Masquelet诱导膜实验模型的建立:本研究中大鼠股骨Masquelet诱导膜实验模型的建立方法精确、简单有效,可重复性高。基于三元调控理论探讨骨碎补总黄酮对诱导膜形成影响的实验研究:骨碎补总黄酮可上调三元调控通路各关键因子（PDGF-BB、CD31、Endomucin）及VEGF、HMGB1基因、蛋白的表达。但由于诱导膜中不存在CD31hiEmcnhi血管,故在Masquelet技术的诱导膜形成期存在三元调控机制的科学假说并不存立,相关的分子机制有待进一步探索。