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SIX家族一类含有homeodomain结构域的转录因子,脊椎发育过程中发挥着重要作用,SIX基因家族总共有6个成员:SIX1,SIX2,SIX3,SIX4,SIX5,SIX6。SIX家族是是So,Optix和Dsix4基因在果蝇中的同源物,他们分别对应SIX1/SIX2(So),SIX3/SIX6(Optix),SIX4/SIX5(Dsix4),视网膜发育基因网络(RDGN),最早在果蝇的眼部发育中被发现,RDGN是组织发育的重要调节因子,视网膜发育基因网络主要是由以下成员构成:dac/Dach;eya/Eya;so/Six和PAX6样的两个同源域蛋白(ey和toy)组成,这类基因在进化中高度保守,在哺乳动物中,在器官发育的调控网络中,转录因子并不是通过简单的顺序激活或者抑制下游的信号分子来实现的,而是需要通过多种复杂的反馈回路来对发育进行精密的调控。在肿瘤中,RDGN调控网络被异常调节,其中Eya和Six基因的表达被上调,Dach基因的表达被下调,在果蝇中眼睛的发育中,So的缺失会导致复眼的消除,Optix在非视网膜组织中表达诱导眼睛的形成,而在中胚层的发育过程中,Dsix4起到了重要作用,如肌肉、性腺与脂肪组织。最近的报道发现SIX家族成员与癌症的发生发展有着密切关系,但SIX家族的一些成员(SIX1SIX2 SIX4)对乳腺癌细胞进程的调控机制仍不清楚。方法:(1)构建用于表达SIX1,SIX2,SIX4基因的真核表达载体。(2)通过免疫亲和层析和质谱联用的方法鉴定与SIX1的相互作用蛋白,通过免疫共沉淀的实验方法对质谱结果进行验证。(3)进行GST pull down分析SIX1与Nu RD(MTA1/MTA2)复合物的在相互作用模式。(4)通过查阅文献以及分析数据库GSE93925筛选出SIX1,MTA1共同的靶基因BRCA1,并通过荧光素酶报告基因实验以及染色质免疫共沉淀实验验证靶基因(5)在细胞系中进行一系列的表型实验,验证SIX1 SIX2 SIX4对乳腺癌细胞增殖及侵袭能力的影响。结果:(1)SIX1与Nu RD(MTA1/2)复合物在体内具有相互作用,而不与Nu RD(MTA3)存在相互作用。(2)SXI1与MTA1/MTA2有直接相互作用。(3)SIX1与MTA1都可以结合在BRCA1的启动子区域,并且可以发挥转录抑制的功能从而抑制BRCA1基因的表达。(4)SIX1 SIX2 SIX4可以促进乳腺癌细胞的增殖以及侵袭。结论:SIX1与Nu RD/(MTA1/2)形成转录抑制复合物,SXI1与MTA1都能够结合BRCA1的启动子,抑制BRCA1的转录活性,增强乳腺癌细胞的增殖和转移的能力,SIX2与SIX4可能通过促进乳腺癌细胞的EMT过程,从而促进乳腺癌细胞的增殖和转移。