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α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)是人类血浆中最丰富的蛋白酶抑制物,主要是由肝细胞合成的一种糖蛋白,在单核巨噬细胞、肠上皮细胞、肾实质等肝外组织及某些肿瘤细胞中也能产生,它能抑制多种蛋白酶及多种丝氨酸内切肽酶。1989年,人血浆α1-AT制剂获得美国FDA批准用于严重α1-AT缺乏的患者的替代治疗。随着基因工程技术的发展,重组人血浆α1-AT获得成功表达,但目前尚无重组表达的产品被批准上市。 目前经FDA批准应用于α1-AT缺乏疾病替代治疗的α1-AT制剂仍供不应求,国内尚无同类产品问世,且生产血液制剂要产生大量的Cohn FIV-1废弃组分,因此开发新血液制剂α1-AT无论在血浆综合利用理论研究及实际应用方面均具有重要意义。 以Cohn FIV-1组分为原料,加适量脂蛋白去除剂(LRA)室温搅拌1小时处理后,经四种不同的层析纯化工艺路线分离纯化α1-抗胰蛋白酶,其中DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析结合Sephacryl S-200凝胶过滤层析和Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析结合Sephacryl S-200凝胶过滤层析两种纯化工艺纯化的α1-AT分别达到100%和95%。对DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析结合Sephacryl S-200凝胶过滤层析纯化α1-AT的工艺进行初步放大,纯化的α1-AT纯度仍可达95.5%。纯化的α1-AT表观分子量为55.9kD,p14.55,为酸性蛋白质。用免疫双扩散试验、微量免疫电泳、免疫印迹分析对其进行鉴定,证明其具有良好的免疫反应性及较高的纯度。以胰蛋白酶抑制能力试验(微量法)测其生物活性,DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析结合Sephacryl S-200凝胶过滤层析纯化的α1-AT比活性为680.67±34.58IU/mg(n=3),活性回收率为48.35±5.15%(n=3);Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析结合Sephacryl S-200凝胶过滤层析纯化工艺纯化的α1-AT比活性为328.00±44.42IU/mg(n=3),活性回收率为30.40±5.23%(n=3);前一种层析纯化工艺路线初步放大试验所获α1-AT比活性为645.43±