第一部分HER2+乳腺癌异粘蛋白MTDH的表达新辅助治疗疗效关系的研究。目的:探讨HER2+赫赛汀联合新辅助治疗患者MTDH的表达与临床病理特征及治疗疗效关系。方法:回顾性分析2009年01月至2017年07月河北医科大学第四医院使用赫赛汀联合新辅助化疗的局部晚期HER2+患者资料,共144例,为实验组,使用SPSS22病例对照匹配（Case Control Matching）,1:1匹配同期局部晚期HER2+未使用赫赛汀的新辅助化疗患者为对照组共144例。上述患者均首先经免疫组化证实HER2+,若HER2 2+,则经过FISH检测,明确HER2扩增,分析实验组和对照组患者MTDH表达与临床病理特征及化疗疗效以及预后的关系。两独立样本非参数检验,单因素χ2检验,多因素Logistic回归分析,P<0.05为差异有统计学意义。所有统计均采用双侧检验。结果:1.实验组与对照组临床特征、化疗方案选择等进行两独立样本非参数检验,结果显示两组病例选择无差异。2.实验组与对照组临床疗效评价,无差异,可能由于评价方式不同导致（P=0.154）。病理疗效评价,实验组MP分级及病理淋巴结分期显著优于对照组（P<0.05）,而在p CR率上,两组比较虽无统计学意义,但实验组（23.6%）相较于对照组（17.3%）有明显增高趋势。3.对比临床病理学特征与实验组新辅助疗效关系发现,TNM分期越高,病理N分期越高,新辅助治疗效果越差（P<0.05）,Ki-67>14%时新辅助治疗效果更佳（P=0.027）,蒽环类序贯紫杉+赫赛汀化疗效果更佳（P<0.05）,MTDH表达越高新辅助化疗效果越差（P<0.05）而年龄、受体情况、HER2分层、赫赛汀单周与三周方案均与化疗有效率无显著性相关（P>0.05）。4.MTDH表达,TNM分期,淋巴结转移个数,Ki-67表达,化疗方案选择,p CR率与新辅助化疗疗效相关（P<0.05）,而年龄、ER、PR、曲妥珠单抗三周和单周方案与新辅助治疗疗效无关。进行单因素Logistic回归分析,发现MTDH低表达,TNMⅡ期,AC-TH化疗方案选择以及Ki-67高表达的患者对加用赫赛汀的新辅助治疗更敏感,多因素Logistic回归分析发现MTDH表达,TNM分期、化疗方案选择为影响化疗效果的独立因素。第二部分HER2+乳腺癌患者新辅助化疗联合赫赛汀治疗的MTDH表达与预后关系的探讨目的:MTDH表达对于局部晚期HER2+乳腺癌患者新辅助化疗联合曲妥珠单抗治疗和单纯新辅助化疗两组患者预后影响的探讨。方法:筛选河北医科大学第四医院2009-2017年曲妥珠单抗联合新辅助化疗的乳腺癌患者,共144例,为实验组,随访成功144例,同时间段,单纯新辅助化疗患者,共144例,为对照组,其中137例患者成功随访,上述所有患者均术前穿刺标本进行FISH检测,或免疫组化染色,证实为HER2扩增或HER2+,对MTDH蛋白进行免疫组化染色。分析实验组患者与对照组患者MTDH的表达与临床病理特征及预后的关系。采用SPSS22.00进行分析,Kaplan-Meier进行生存分析,Cox单因素、多因素进行回归分析,卡方检验进行相关性分析,P<0.05有统计学意义。结果:1.实验组144例患者MTDH高表达者45.14%（65/144）,低表达者,54.86%（79/144）,其中,MTDH状况与患者淋巴结转移情况（X2=71.001,P<0.05）、Ki-67的表达状况（X2=35.002,P<0.05）,MP分级（X2=16.421,P<0.05）有关,有显著性差异（P<0.05）,而与PR、TNM分期、组织学分级、ER的表达并无相关性（P>0.05）。对照组中144例患者50.00%（72/144）MTDH低表达,50.00%（72/144）高表达,MTDH表达状况与TNM分期（X2=12.119,P<0.05）、Ki-67（X2=27.998,P<0.05）、组织学分级（X2=10.001,P<0.05）、淋巴结转移（X2=31.001,P<0.05）、MP分级（X2=5.998,P<0.05）、有关,差异有统计学意义（P<0.05）,而与年龄、ER、PR差异无统计学意义。2.截至访视日期实验组共11例患者出现死亡,中位生存79月,1年、3年、5年总生存率为94.9%、93.9%、84.0%;截至访视日期对照组共28例患者出现死亡,中位生存54月,1年、3年、5年生存率分别为94.4%、77.9%、71.6%,两者有显著差异（X2=4.204,P=0.040）（Fig.3）。实验组MTDH表达、TNM分期、淋巴结转移状况可以影响患者总生存期。（P<0.05）。截至访视日期实验组共21例患者出现远位转移或者局部复发,中位无病生存期为48月,1年、3年、5年无病生存率为91.9%、80.1%、77.9%;截至访视日期对照组共55例患者出现远位转移或者局部复发,无病中位生存期39月,1年、3年、5年无病生存率为89.9%、64.1%、48.9%,两者差异显著（X2=10.089,P=0.001）（Fig.4）。实验组患者TNM分期、淋巴结转移状况、Ki67表达状况、MTDH表达可以影响患者无病生存（P<0.05）3.单因素Cox风险比例进行回归分析,结果显示,组织学分级、MTDH表达、MP分级、TNM分期、Ki-67、淋巴结状况对患者的OS有影响,差异显著（P<0.05）。多因素Cox风险比例回归分析结果显示,MTDH表达情况、淋巴结状况、TNM分期、Ki-67对OS有显著影响,差异显著（P<0.05）。单因素Cox风险比例回归分析结果显示,患者的组织学分级、MTDH表达、淋巴结转移情况、TNM分期、PR、MP分级、Ki-67对患者的DFS有影响,差异（P<0.05）。多因素Cox风险比例回归分析结果显示TNM分期、MTDH表达情况、淋巴结转移情况对DFS有显著影响,差异显著（P<0.05）。第三部分shRNA沉默MTDH基因对HER2+乳腺癌SK-BR-3细胞曲妥珠单抗联合紫杉醇敏感性影响及对裸鼠成瘤能力的研究目的:探讨MTDH基因沉默对HER2+乳腺癌SK-BR-3细胞增殖及对紫杉醇联合赫赛汀耐药性的影响,并研究在裸鼠体内MTDH沉默对HER2+乳腺癌细胞增殖能力的影响。方法:1.慢病毒侵染方法,构建稳定低表达MTDH的HER2+乳腺癌细胞SK-BR-3,检测转染效率方法选择western-blot及RT-qPCR,构建稳定转染的细胞株,命名为sh-MTDH。2.MTS方法检测MTDH基因对紫杉醇和赫赛汀配伍处理后,乳腺癌SK-BR-3细胞增殖能力的影响。3.稳定低表达MTDH的乳腺癌细胞株sh-MTDH及sh-NC建立裸鼠皮下移植瘤模型。4.检测sh-MTDH和sh-NC细胞在裸鼠体内的生长情况,并测量各组裸鼠肿瘤的大小。5.western-blot法,免疫组化法检测裸鼠移植瘤组织中MTDH蛋白表达水平。结果:1.RT-qPCR和免疫荧光法显示,成功构建稳定低表达MTDH的HER2+乳腺癌细胞株sh-MTDH。2.显微镜下观察稳转MTDH基因的乳腺癌细胞,以及紫杉醇和赫赛汀处理后乳腺癌细胞的形态学改变。转染sh NC和sh MTDH的乳腺癌细胞生长状态良好,形态并未发生明显改变。而加入0.1ug/ml紫杉醇和10ug/ml赫赛汀24小时后,细胞呈现凋亡状态,形态表现为皱缩或变圆。3.采用MTS方法检测不同表达水平MTDH的乳腺癌细胞SK-BR-3对紫杉醇和赫赛汀治疗敏感性的影响。在乳腺癌细胞SK-BR-3中,敲低MTDH可明显增加对紫杉醇和赫赛汀联合用药的敏感性。4.裸鼠成瘤实验结果显示,敲低MTDH基因表达后,sh-MTDH细胞在体内形成的种植瘤,其重量显著减轻,体积显著减小（P<0.05）5.western-blot法,免疫组化法分析裸鼠种植瘤MTDH表达水平,sh-MTDH种植瘤中MTDH蛋白表达显著降低（P<0.05）。