论文部分内容阅读
大豆遗传转化是目前研究的热点,利用农杆菌介导大豆外源基因转化可以大大加速大豆品种改良进程,获得高产优质新品种。但目前大豆的遗传转化效率较低,其主要原因是大豆组织培养再生困难、重复性差、基因型依赖性强、培养条件复杂,这在很大程度上限制了利用基因工程方法对大豆的遗传改良,因此,建立一套高效、简便的大豆再生体系是大豆遗传转化的必要前提。
本研究以河北省4个优质大豆品种为材料(高蛋白品种:冀豆7号、冀豆16号和冀豆17号;高油品种:冀黄13号)探讨了激素种类、浓度、激素诱导时间等因素对胚尖生长过程的影响。结果表明,供试4个品种的胚尖丛生芽的平均数目均随6-BA浓度的升高而增加,而出芽率和再生率随着6-BA浓度的升高而降低。理想的遗传转化受体系统不仅要有较高的植株再生率,而且要有一定的丛生芽数目。利用0.5~1.0mg/L的6-BA诱导培养5d,大豆胚尖的出芽率、植株再生率及胚尖丛生芽数等综合指标较好。通过对胚尖再生体系与传统的子叶节再生体系以及这两种外植体对筛选抗生素敏感性的比较,证明以胚尖为外植体的大豆再生体系具有再生率高、培养条件简便、周期性短、重复性好、对筛选抗生素敏感等优点。在建立胚尖高效再生体系的基础上,利用GUS基因瞬时表达检测方法对农杆菌转化胚尖外植体的条件进行了摸索。结果表明,农杆菌OD值在0.6~0.8,暗培养条件下添加200μmol/LAS有利于转化。采用农杆菌介导法对高产高蛋白品种冀豆16进行了E2基因遗传转化研究,经PCR检测初步证明了E2基因已转入冀豆16,转化率为5.88%。