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为解决新月菱形藻大规模培养过程中存在着培养密度低、容易污染和操作条件难控制等技术难题,本文从新月菱形藻培养基配方优化入手,对新月菱形藻在平板式光生物反应器中的生长特性进行了研究,并在流加和半连续培养模式下考察了不同培养方式下细胞生物量、胞内多糖和蛋白质含量的变化,获得了以下主要结果:
⑴利用正交实验的方法获得了新月菱形藻培养基中常量元素与微量元素的优化配方:NaNO3 300 mg/L、NaH2PO4 25mg/L、NaHCO3 500 mg/L、Na2SiO3 100 mg/L、Mn2+0.80 μmol·L-1、Cu2+0.08 μmol·L-1、Zn2+0.10 μmol·L-1、Mo6+0.02 μmol·L-1、Co2+0.004 μmol·L-1,并添加f/2维生素。与f/2配方相比,利用该配方细胞生物量的产量可提高约200[%]。
⑵在平板式光生物反应器中,对新月菱形藻的生长特性进行了考察。建立了新月菱形藻的光衰减模型,并推导了平板式光生物反应器平均光强公式。对光径为30 mm、50 mmm和100 mm平板式光生物反应器的Eavg/E进行比较发现,光径为30 mm的平板反应器具有较高的光利用率;30 mm平板反应器中收获的微藻生物量约为100mm平板反应器的3倍。
⑶为探讨更新率、更新周期与藻细胞的生长代谢及氮、磷营养盐的利用之间的关系,在平板式光生物反应器中对新月菱形藻进行了半连续培养。结果表明更新率与总采收量之间呈抛物线关系。当更新率为33[%]时,细胞的最大采收量达到了2.11×1012 cell;当更新率为33[%],更新周期为1d时,细胞的总采收量可进一步提高到3.12×1012 cell。培养液中氮和磷的平均含量随更新率的增大而上升;随更新周期的延长而下降。当更新率为10[%]时,细胞内的蛋白质平均含量最高;当更新率为23[%]时,细胞内多糖的平均含量最大。综合考虑各生长指标,新月菱形藻光生物反应器半连续培养的适宜条件是更新率和更新周期分别为33[%]和1天。
⑷应用流加培养技术对新月菱形藻分别进行了分批培养、恒速流加培养及变速流加培养。结果表明,流加方式对新月菱形藻的生长、细胞内蛋白质和多糖产量有显著影响。恒速流加培养10d的细胞密度、细胞内蛋白质和多糖的含量分别为1.901×107cell·mL-1,42.82 mg·L-1和95.68 mg·L-1,分别是分批培养的2.29倍、1.60倍和2.15倍。在变速流加培养中,当流加控制因子K=0.167时,细胞密度、细胞内蛋白质和多糖的含量分别是分批培养的4.83倍、6.23倍和6.12倍。