地肤子提取物对苹果树腐烂病菌的生物活性研究

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本研究以苹果树腐烂病菌(Valsa mali Miyabe et Yamada)为研究对象,测定了20种植物乙醇提取物对供试菌的生物活性,并对生物活性最强的地肤子进行了活性成分的分离,获得了活性成分流分L7并对其作用机理进行研究,实验结果如下:1.采用菌丝生长速率法测定了20种植物乙醇提取物对供试菌的生物活性,结果表明:在供试浓度为2.00mg·mL-1时,地肤子、狼毒、百里香等20种植物提取物对供试菌的菌丝生长有抑制作用,其中地肤子提取物的抑菌效果最为明显,抑菌率分别为92%。2.以石油醚、氯仿和甲醇为溶剂依次对地肤子乙醇提取物进行萃取,并测定萃取物抑菌活性,结果表明:三种萃取物均有较好的抑菌活性,药物浓度为2mg·mL-1条件下抑菌率分别为石油醚萃取物96.5%,三氯甲烷萃取物75.2%,甲醇萃取物94.3%,抑制中浓度(EC50)分别为石油醚萃取物68.7mg·L-1,三氯甲烷萃取物137.6mg·L-1,甲醇萃取物95.1mg·L-1。3.对地肤子石油醚萃取物进行层析分离和TLC检测,合并相同成份共得到8个流分,对8个流分分别进行生物活性测定,结果表明:有六个流分对供试菌有生物活性,其中流分L7抑菌活性最高,72h时抑菌率为96.7%,EC50为1.1mg·L-1。4.用浓度为0.1 mg·mL-1的流分L7处理供试菌菌丝后,经显微观察发现,处理组菌丝粗细程度不一,多有菌丝畸形,菌丝尖端干瘪萎缩或菌丝体内有气泡状内容物。通过流分L7处理供试菌后,发现流分L7增大了菌丝细胞膜的通透性;同时,引起菌丝体内可溶性蛋白、还原糖和丙酮酸含量不同程度的降低。
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