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目的:探讨沉默信息调节因子3(SIRT3)对肝癌细胞恶性增殖的影响及机制研究。方法:1.用western blot和qRT-PCR检测SIRT3在40例肝癌组织和癌旁组织中的表达水平,western blot检测SIRT3在8种肝癌细胞、两种永生化肝细胞和三个正常肝组织中的蛋白表达水平。2.在肝癌细胞中瞬时过表达SIRT3后,通过台盼蓝排斥实验分析过表达SIRT3对肝癌细胞增殖的影响,Brdu标记实验检测肝癌DNA合成情况,软琼脂形成实验检测肝癌细胞不依赖支持物生长的能力,平板集落形成实验检测SIRT3对肝癌细胞集落形成能力的影响,流式细胞术检测过表达SIRT3对肝癌细胞周期的影响及对肝癌细胞凋亡的影响,western blot检测SIRT3对肝癌细胞凋亡过程中产生的PARP裂解片段的影响。3.通过siRNA干扰技术靶向沉默永生化肝细胞L02中SIRT3的表达,并通过western blot验证SIRT3基因的沉默效果,通过台盼蓝排斥实验分析SIRT3基因沉默对肝癌细胞生长的影响,EdU标记实验检测肝癌DNA合成情况,流式细胞术检测SIRT3基因沉默对肝癌细胞凋亡的影响。4.通过qRT-PCR筛选SIRT3过表达引起线粒体内凋亡相关基因的mRNA水平变化,并用western blot检测筛选出来的凋亡相关基因蛋白的变化情况。5.在裸鼠异种移植瘤模型中验证SIRT3对肿瘤生长的影响。结果1. SIRT3在肝癌组织中的蛋白水平和mRNA水平较正常肝组织显著降低,同时SIRT3在肝癌细胞中的蛋白水平较永生化肝细胞、正常肝组织降低。2.过表达SIRT3抑制肝癌细胞的增殖,抑制肝癌细胞DNA合成、肝癌细胞不依赖支持物生长的能力,及肝癌细胞的集落形成能力。SIRT3能显著诱导肝癌细胞G2期细胞周期阻滞。过表达SIRT3使肝癌细胞中凋亡细胞数显著增加,并伴随凋亡PARP裂解片段蛋白表达增加。3. SIRT3基因沉默可促进永生化肝细胞L02的生长和细胞DNA的合成。在表阿霉素的作用下SIRT3基因沉默可显著抑制L02凋亡。4. SIRT3过表达使肝癌细胞线粒体凋亡相关蛋白Bax明显升高,而且SIRT3过表达使Bax从胞浆转位到线粒体增多,Bax基因沉默可逆转SIRT3过表达引起的凋亡。5. SIRT3过表达抑制了肝癌的生长在裸鼠异种移植瘤中得到了验证。结论SIRT3可通过Bax信号通路诱导肝癌细胞凋亡。