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目的: 通过构建XIAP基因3'非编码区(3'untranslated region,3'UTR)表达载体,研究XIAP3'UTR表达对人乳腺癌细胞生物学行为的影响。 方法: 培养人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231,进行以下实验: 1.通过无血清饥饿法观察两株细胞不同时间点XIAP mRNA和蛋白的变化。 2.采用克隆技术构建XIAP基因非编码区3'UTR的表达质粒,并通过质粒转染MCF-7和MDA-MB-231后直接筛选的方法建立XIAP3'UTR过表达稳转细胞系。 3.通过MTT实验、克隆形成实验、凋亡实验、Transwell实验和划痕体外功能实验检测XIAP3'UTR过表达对上述两株人乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移以及凋亡能力的影响。 4.通过MCF-7细胞裸鼠移植瘤实验观察XIAP3'UTR过表达对体内成瘤能力的影响。 5.应用免疫组化标记Ki-67和TUNEL法检测裸鼠移植瘤的增殖与凋亡现象。 6.通过qRT-PCR和Western blot方法检测XIAP3'UTR稳定表达的两株乳腺癌细胞中XIAP mRNA和蛋白的表达情况。 结果: 1.无血清饥饿条件下的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231出现XIAP的mRNA水平升高,而蛋白水平下降。 2.测序证实XIAP3'UTR表达载体基因序列完全正确,提示载体构建成功。 3.qRT-PCR结果显示,转染XIAP3'UTR表达载体的乳腺癌细胞中XIAP的3'UTR水平均有稳定升高,提示XIAP3'UTR过表达稳转细胞系构建成功。 4.体外功能实验结果显示,XIAP3'UTR过表达可以促进乳腺癌细胞的生长增殖和侵袭迁移能力并抑制细胞凋亡(P<0.05)。 5.体内裸鼠成瘤实验显示,XIAP3'UTR稳定表达的乳腺癌细胞MCF-7可以促进裸鼠移植瘤的生长速度和转移能力(P<0.05)。 6.免疫组化Ki-67标记及TUNEL显色结果显示,XIAP3'UTR实验组移植瘤与对照组相比存在高增殖低凋亡现象。 7.qRT-PCR和Western-blot检测方法显示XIAP3'UTR稳定表达的乳腺癌细胞中XIAP的mRNA和蛋白水平均有上调,提示 XIAP3'UTR过表达可以促进MCF-7和MDA-MB-231细胞XIAP的转录水平增加。 结论: XIAP3'UTR过表达可以促进乳腺癌细胞的生长增殖、侵袭、迁移和转移能力,并抑制细胞凋亡。XIAP3'UTR过表达扮演癌基因功能,可能成为肿瘤发生发展新的分子机制。